銅綠假單胞菌PA2800在耐藥性和致病性中的作用研究.pdf

1、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一種革蘭氏陰性致病菌，在自然界中分布廣泛并且致病率很高，是引起院內(nèi)感染的三大病原菌之一。隨著抗生素藥物的廣泛使用，銅綠假單胞菌多重耐藥菌株和耐藥率不斷上升，多種抗生素失去其療效，使得臨床的抗感染治療越來越困難。研究銅綠假單胞菌中的耐藥基因及耐藥機理對于控制銅綠假單胞菌感染具有重要的意義。在實驗室的前期研究中，通過對銅綠假單胞菌轉(zhuǎn)座突變體文庫進行藥物敏感性篩選，發(fā)現(xiàn)基因PA28

2、00突變體對四環(huán)素和環(huán)丙沙星敏感性升高。
　　 本文對PA2800基因進行了進一步深入研究。首先通過基因敲除的手段構(gòu)建PA2800的基因敲除突變體，并與野生型銅綠假單胞菌比較，測定了其在固體和液體LB中抗生素抗性的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在固體和液體LB中PA2800突變體對四環(huán)素、環(huán)丙沙星和氯霉素敏感性都升高，證實PA2800基因與銅綠假單胞菌耐藥性相關。研究抗生素對這一基因的調(diào)節(jié)發(fā)現(xiàn)，低于抑制濃度的四環(huán)素和紅霉素對PA2800的表達具

3、有激活作用，暗示這一基因有可能在抗生素存在下誘導銅綠假單胞菌產(chǎn)生抗性。同時，致病力比較研究發(fā)現(xiàn)PA2800和銅綠假單胞菌致病有關，用野生型PAO和PA2800突變體感染果蠅，突變體對果蠅的致死率更高。相關毒性因子在突變體和野生型中的表達測定表明，rhlR和znuA在PA2800突變體中的表達增強，這可能是導致突變體較野生型致死率高的因素。同時，我們還發(fā)現(xiàn)oprH在PA2800突變體中的表達增強。OprH是一個外膜孔蛋白，它的過量表達可以