反義整合素連接激酶寡核苷酸對(duì)上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)型的調(diào)控及抑制喉癌轉(zhuǎn)移的研究.pdf

1、研究背景及目的：喉鱗狀細(xì)胞癌(laryngeal squamous cellcarcinoma,LSCC)是頭頸部最常見的惡性腫瘤之一，腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是造成喉癌患者死亡的主要原因之一，喉癌發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移是一個(gè)多環(huán)節(jié)、多步驟的復(fù)雜過程，包括腫瘤細(xì)胞粘附、移動(dòng)、酶降解和血管生成等多種腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為，轉(zhuǎn)移的確切機(jī)制目前尚不十分明確。
　　 整合素連接激酶(integrin-linked kinase,ILK)是一個(gè)59KD的細(xì)胞內(nèi)

2、信號(hào)蛋白，具有絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶活性。ILK不僅在正常發(fā)育中起著重要作用，其在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中也有著與其它已知的癌基因一樣的生物學(xué)效應(yīng)。ILK介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的連接，調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的運(yùn)動(dòng)，參與細(xì)胞粘附的形成，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的粘附和轉(zhuǎn)移。
　　 上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)型(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是多細(xì)胞生物形態(tài)學(xué)發(fā)生中的一個(gè)基本生理過程。是指上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的現(xiàn)象，在此

3、過程中，上皮細(xì)胞極性喪失，遷移能力增強(qiáng)，同時(shí)逐漸獲得間質(zhì)表型。上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)型參與了上皮源性腫瘤的發(fā)生及發(fā)展，尤其在癌的侵襲和轉(zhuǎn)移方面。因此，對(duì)EMT在腫瘤形成和侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及其調(diào)控機(jī)制的研究正越來越受到人們的關(guān)注。目前， ILK作為一種EMT的誘導(dǎo)因子，在喉癌方面的研究幾乎是一片空白。因此，我們以人喉鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株Hep-2為研究對(duì)象，采用反義ILK寡核苷酸對(duì)其進(jìn)行轉(zhuǎn)染，就ILK對(duì)人喉鱗狀細(xì)胞癌Hep-2細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)型的影

4、響及其在腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移過程中的作用和機(jī)制進(jìn)行了研究。
　　 方法：采用免疫組織化學(xué)法研究臨床喉鱗狀細(xì)胞癌標(biāo)本中ILK的表達(dá)與臨床病理因素的相關(guān)性，并且進(jìn)一步以人喉鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株Hep-2為研究對(duì)象，采用ILK反義寡核苷酸對(duì)其進(jìn)行轉(zhuǎn)染，應(yīng)用MTT、流式細(xì)胞術(shù)分析、Western Blot以及Transwell小室等分子生物學(xué)技術(shù)和方法，深入研究了ILK對(duì)人喉鱗狀細(xì)胞癌Hep-2細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)型相關(guān)基因表達(dá)的影響及其在腫瘤侵襲

5、、轉(zhuǎn)移過程中的作用和機(jī)制。
　　 結(jié)果：ILK在56例喉鱗狀細(xì)胞癌患者癌組織標(biāo)本中的陽性表達(dá)率(66.07％)明顯高于ILK在28例癌旁組織中的陽性表達(dá)率(21.43％)，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示二者存在顯著性差異(p<0.05)。并且，ILK的高表達(dá)與喉癌患者病理分級(jí)及是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。ILK在人喉鱗狀細(xì)胞癌Hep-2細(xì)胞中亦呈高表達(dá)，免疫細(xì)胞化學(xué)顯示ILK在人喉鱗狀細(xì)胞癌Hep-2細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)以胞質(zhì)為主，胞核僅見少量弱表

6、達(dá)。反義ILK干擾降低了人喉鱗狀細(xì)胞癌Hep-2細(xì)胞的ILK的表達(dá)，抑制了細(xì)胞的增殖并增加了細(xì)胞的凋亡。EMT相關(guān)基因的表達(dá)亦出現(xiàn)了相應(yīng)的變化：間充質(zhì)標(biāo)志物Vimentin蛋白表達(dá)水平降低，上皮性標(biāo)志物E-cadherin的表達(dá)顯著增加。這些基因蛋白水平的改變也同時(shí)導(dǎo)致了人喉鱗狀細(xì)胞癌Hep-2細(xì)胞異質(zhì)粘附能力、遷移能力以及侵襲能力的降低。
　　 結(jié)論：ILK可促進(jìn)人喉鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生轉(zhuǎn)移，反義ILK干擾可誘導(dǎo)人喉鱗狀細(xì)胞癌Hep