ADRM1在肝細胞癌中的生物學作用及其對NF-κB活性的影響.pdf

1、目的:原發(fā)性肝癌是全球范圍內(nèi)第五大最為常見的惡性腫瘤，并高居全球惡性腫瘤死因第二位。目前全球原發(fā)性肝癌病人中最為常見的病理類型是肝細胞癌，所占比例大約為70％到85％。盡管肝細胞癌已被深入研究多年，其病因及分子生物學機制尚未完全闡明。與此同時，目前針對肝細胞癌的治療手段仍十分有限，肝癌患者的預后仍不容樂觀。因此，研究探索與HCC發(fā)生發(fā)展密切相關的分子生物學機制對于提高HCC診斷及治療水平具有十分重大的意義。
　　 ADRM1(a

2、dhesion-regulating molecule1)是真核細胞26S蛋白酶體重要的泛素受體之一，并且能與蛋白酶體19S調節(jié)亞基通過帽狀結構相連結從而將去泛素化酶UCH37募集至26S蛋白酶體。近年來越來越多的研究表明ADRM1在多種惡性腫瘤中呈高表達狀態(tài)，并且可能扮演了類似癌基因的角色。盡管如此，ADRM1肝細胞癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用尚不明了。在本課題中，我們研究了ADRM1在肝細胞癌中的表達情況、ADRM1在肝癌細胞惡性生物學行

3、為中的功能作用及其可能的下游分子機制，以期為肝細胞癌的診斷、治療提供新的潛在分子靶點。
　　 方法:采用實時定量RT-PCR和免疫組織化學方法檢測肝細胞癌組織和癌旁肝組織ADRM1 mRNA和蛋白表達情況，采用RT-PCR和Western blot檢測三種不同轉移潛能肝癌細胞(Hep3B、MHCC97-L和MHCC97-H) ADRM1 mRNA和蛋白表達水平;利用短發(fā)夾干擾RNA技術沉默MHCC97-H細胞ADRM1表達水平，

4、并采用MTT、流式細胞術、Transwell小室實驗分別檢測基因沉默ADRM1表達對MHCC97-H細胞增殖、凋亡、細胞周期、體外侵襲轉移能力的影響;采用Western blot檢測上述三種肝癌細胞核內(nèi)NF-κB p65和IκB-α表達水平，以期揭示ADRM1表達與肝癌細胞NF-κB水平的潛在聯(lián)系。利用RT-PCR和Western blot分別檢測基因沉默ADRM1表達后MHCC97-H細胞IκB-α的mRNA和蛋白表達及核內(nèi)NF-κB

5、 p65蛋白表達的變化，并采用凝膠遷移率實驗(EMSA)檢測ADRM1基因沉默對MHCC97-H細胞NF-κB活性水平的影響。
　　 結果:ADRM1 mRNA和蛋白在肝細胞癌組織中的表達水平顯著高于其在癌旁肝組織中的表達水平。此外，ADRM1在肝癌組織中的蛋白表達水平與肝癌靜脈侵犯密切相關。ADRM1在Hep3B、MHCC97-L和MHCC97-H細胞中的mRNA和蛋白表達水平逐次升高，與肝癌細胞的轉移能力相關;我們成功構建特

6、異性針對ADRM1的短發(fā)夾干擾RNA表達載體并將其轉染至MHCC97-H細胞。后續(xù)的功能實驗表明基因沉默ADRM1表達能在體外抑制MHCC97-H細胞增殖、侵襲、轉移能力，并導致細胞周期G0/G1期阻滯和自發(fā)凋亡增多;在上述三種肝癌細胞中(Hep3B、MHCC97-L和MHCC97-H)，核內(nèi)NF-κB p65表達水平逐漸升高，與ADRM1表達趨勢一致，而IκB-α表達水平逐漸降低?；虺聊珹DRM1后，MHCC97-H細胞核內(nèi)NF-κ

7、B p65蛋白表達下調，IκB-α蛋白表達水平上升，但IκB-αmRNA表達無明顯變化。最為重要的是，基因沉默ADRM1后MHCC97-H細胞NF-κB活性水平下降。
　　 結論:ADRM1在肝細胞癌組織中呈高表達狀態(tài)，并且其表達水平與肝癌靜脈侵犯密切相關;ADRM1在肝癌細胞中的表達水平與細胞轉移能力相關;針對ADRM1的特異性基因沉默能在體外顯著抑制肝癌細胞增殖、侵襲、轉移能力，并且能上調自發(fā)凋亡水平，引發(fā)細胞周期G0/G1