利用細(xì)胞炎癥模型研究牛蒡低聚果糖的抗炎作用及相關(guān)機(jī)制.pdf

1、炎癥是機(jī)體對(duì)各種致炎因素及其所產(chǎn)生損傷的防御反應(yīng)，但過(guò)度的炎癥反應(yīng)也會(huì)對(duì)機(jī)體造成損傷。目前臨床上常用的抗炎藥主要有兩類:非甾體抗炎藥和甾體類抗炎藥。雖然這兩類抗炎藥都有一定的臨床抗炎效果，但長(zhǎng)期大量使用也會(huì)產(chǎn)生一系列不良反應(yīng)，如胃粘膜、肝臟、腎臟損害等。天然藥物具有來(lái)源廣、造價(jià)低、副作用小等特點(diǎn)，隨著對(duì)天然藥物研究的不斷深入，部分天然藥物的抗炎作用已經(jīng)得到認(rèn)可。尋找低毒高效的新型天然抗炎藥物是當(dāng)前的研究熱點(diǎn)之一。
　　 牛蒡(b

2、urdock)屬菊科牛蒡?qū)僦备?，是兩年生大型草本植物，具有藥食同源的特點(diǎn)。牛蒡根含有多種生物活性物質(zhì)，其藥理作用廣泛。其中牛蒡低聚果糖（burdock fructo-oligsaccharide，BFOS）是從牛蒡根中提取純化的寡糖。已發(fā)現(xiàn)BFOS具有抗腫瘤、抗疲勞以及增強(qiáng)自身免疫力等功能，但牛蒡低聚果糖的抗炎作用研究尚未見報(bào)道。
　　 本研究以牛蒡低聚果糖為研究對(duì)象，采用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）

3、處理小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7細(xì)胞建立炎癥模型，研究牛蒡低聚果糖的抗炎作用及作用機(jī)制，為開發(fā)新的天然抗炎藥物提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)證據(jù)。
　　 [研究背景]
　　 炎癥是機(jī)體對(duì)有害刺激因素的防御性反應(yīng)，是損傷與抗損傷并存的病理過(guò)程，其中巨噬細(xì)胞在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。LPS是十分重要的致炎因子，它能夠刺激體內(nèi)的巨噬細(xì)胞合成和釋放多種內(nèi)源性活性因子，進(jìn)而誘發(fā)炎癥。利用LPS處理巨噬細(xì)胞是常用的體外炎癥模型造模手段。天然藥

4、物具有低毒、高效及來(lái)源廣泛的特點(diǎn)，其抗炎作用已經(jīng)受到越來(lái)越多的關(guān)注。
　　 牛蒡是一種典型的藥食同源植物，藥理作用廣泛，其毒副作用尚未見報(bào)道。牛蒡低聚果糖是從牛蒡根中分離的寡糖，屬于功能性食用多糖。迄今為止對(duì)BFOS的抗炎作用未見報(bào)道，本課題對(duì)BFOS的抗炎作用及可能機(jī)制進(jìn)行了初步研究。
　　 [研究目的]
　　 采用LPS處理小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7細(xì)胞建立細(xì)胞炎癥模型，研究牛蒡低聚果糖BFOS的抗炎作用

5、及相關(guān)機(jī)制。
　　 [研究方法]
　　 用LPS處理小鼠巨噬系RAW264.7細(xì)胞，建立炎癥模型，用不同濃度BFOS處理，觀察各項(xiàng)炎癥相關(guān)指標(biāo):采用Real-time PCR方法檢測(cè)細(xì)胞因子及炎性介質(zhì)IL-6、MCP-1、TNF-α、COX-2和iNOS的mRNA表達(dá)水平;ELISA對(duì)IL-6和MCP-1分泌情況進(jìn)行檢測(cè);Westem blotting檢測(cè)iNOS和COX-2蛋白表達(dá)情況;初步明確BFOS的抗炎作用后，對(duì)

6、可能涉及的信號(hào)通路中關(guān)鍵分子進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)而探明其抗炎機(jī)制。
　　 [研究結(jié)果]
　　 1.Real-time PCR和ELISA的結(jié)果表明LPS可顯著上調(diào)RAW264.7細(xì)胞中IL-6、MCP-1和TNF-α mRNA水平的表達(dá)及IL-6、MCP-1的分泌，200、400、600μmol/LBFOS均可抑制IL-6、MCP-1和TNF-α的mRNA表達(dá)水平及IL-6、MCP-1的分泌;
　　 2.Real-tim

7、e PCR和Western blotting結(jié)果表明LPS可上調(diào)RAW264.7細(xì)胞中iNOS和COX-2的表達(dá)，200、400、600μmol/L BFOS對(duì)iNOS和COX-2的表達(dá)均有抑制作用;
　　 3.Western blotting結(jié)果表明LPS可顯著上調(diào)RAW264.7細(xì)胞中NF-κBp65及IκB磷酸化水平，200、400、600μmol/L BFOS均可抑制LPS上調(diào)的NF-κBp65和IκB磷酸化水平;

8、>　　 4.Western blotting結(jié)果表明LPS可顯著上調(diào)RAW264.7細(xì)胞中Erk，P38及JNK磷酸化水平，BFOS處理則使三者磷酸化水平降低。
　　 [結(jié)論]
　　 在小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞中，BFOS均可顯著抑制LPS上調(diào)的IL-6、MCP-1和TNF-α轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平的表達(dá)，同時(shí)抑制COX-2及iNOS的表達(dá)，以上結(jié)果顯示BFOS具有抗炎作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)BFOS能夠顯著抑制LPS誘導(dǎo)