CCN3對(duì)肝細(xì)胞肝癌侵襲的作用及相關(guān)機(jī)制的研究.pdf

1、目的：CCN3(NOV，Nephroblastoma overexpressed gene，腎母細(xì)胞瘤過表達(dá)基因)是CCN家族的一個(gè)成員，參與多種細(xì)胞功能的發(fā)生和發(fā)展，包括細(xì)胞生長(zhǎng)，分化，血管生成，粘附等。目前研究者們發(fā)現(xiàn)CCN3在多種惡性腫瘤中高表達(dá)，調(diào)控多種腫瘤的發(fā)生與發(fā)展，如骨肉瘤，食管癌等。然而CCN3在肝細(xì)胞肝癌中的相關(guān)研究尚未報(bào)道。在本研究中，我們對(duì)CCN3在肝癌組織及細(xì)胞中的表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)，并進(jìn)行相應(yīng)的功能實(shí)驗(yàn)，探討相應(yīng)機(jī)

2、制。
　　方法：采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)實(shí)驗(yàn)和蛋白免疫印跡法(Western bolt)檢測(cè)50對(duì)肝癌組織及其癌旁組織中CCN3的表達(dá)水平，統(tǒng)計(jì)分析CCN3的表達(dá)水平和臨床肝癌患者病例資料的相關(guān)性。同時(shí)檢測(cè)肝癌細(xì)胞株MHCC-97H，SMMC-7721，HepG2，Huh7，MHCC-97L及正常人類肝細(xì)胞L02中CCN3的mRNA表達(dá)水平，構(gòu)建CCN3過表達(dá)質(zhì)粒，并通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染并建立CCN3過表達(dá)的肝癌細(xì)胞株

3、。利用transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞劃痕遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CCN3對(duì)肝癌細(xì)胞侵襲遷移能力的影響。Western blot檢測(cè)肝癌細(xì)胞株COX-2的表達(dá)變化來探討相應(yīng)機(jī)制。
　　結(jié)果：研究發(fā)現(xiàn)CCN3的RNA和蛋白水平在人類肝癌組織中均表達(dá)上調(diào)，并且其表達(dá)水平與臨床肝癌患者的轉(zhuǎn)移有一定相關(guān)性。各個(gè)肝癌細(xì)胞株間的CCN3表達(dá)有差異，但均高于人類正常肝細(xì)胞。成功建立了CCN3過表達(dá)的肝癌細(xì)胞株，并通過Western bolt驗(yàn)證CCN3