長鏈非編碼RNA LOC100288637在肝細(xì)胞肝癌中高表達(dá)及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌是目前較為普遍的惡性腫瘤之一，其危害巨大，但發(fā)病機(jī)制仍不是十分明確，目前的治療手段對肝癌的治療效果仍不理想。長鏈非編碼RNA是一類轉(zhuǎn)錄本超過200nt的非編碼RNA，其最初被認(rèn)定為無功能的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，但近來的研究表明其在細(xì)胞活動，疾病與腫瘤的發(fā)生發(fā)展方面都具有重要作用。為了探索針對肝癌更有效的診斷和治療途徑，就與肝癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)的lncRNA進(jìn)行研究具有明確的意義。
　　方法：
　　2.1通過

2、分析GEO數(shù)據(jù)庫的數(shù)據(jù)集GSE58043，發(fā)現(xiàn)長鏈非編碼RNALOC100288637在肝癌組織中高表達(dá)。
　　2.2在肝癌組織和配對癌旁組織以及肝癌細(xì)胞系和正常肝細(xì)胞系中運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測LOC100288637的表達(dá)量。
　　2.3使用脂質(zhì)體向肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染LOC100288637的小干擾RNA，逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測干擾效率，敲低LOC100288637后，用CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測肝癌細(xì)胞的增殖情況變化。

3、r>　　2.4分析GEO數(shù)據(jù)庫的另一個(gè)數(shù)據(jù)集GSE10694，得出微RNA hsa-miR-101-3p在肝癌組織中低表達(dá)。
　　2.5運(yùn)用RNA-hybrid分析hsa-miR-101-3p與LOC100288637的結(jié)合可能性。
　　2.6使用脂質(zhì)體向肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染hsa-miR-101-3p的模擬物，之后運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測LOC100288637的表達(dá)量變化。
　　2.7使用熒光標(biāo)記探針在肝癌細(xì)胞中對L

4、OC100288637進(jìn)行熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)，鑒定其在肝癌細(xì)胞內(nèi)的分布情況。
　　2.8組間比較采用單因素方差分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以(X)±s表示，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。
　　結(jié)果：
　　3.1逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)結(jié)果顯示:LOC100288637在手術(shù)切除肝癌患者的肝癌組織和癌旁組織樣本中的相對表達(dá)量分別為1.80±1.35、0.53±0.34，兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=22.94，p＜0.05)

5、，表明LOC100288637在肝癌組織內(nèi)高表達(dá)。肝癌細(xì)胞系（Huh7、HepG2、PLC/PRF/5、Bel-7704、SMMC-7721）中，LOC100288637的相對表達(dá)量分別為1.34±0.17、0.88±0.05、0.85±0.07、0.58±0.04、1.00±0.17，正常肝細(xì)胞系(L02)中LOC100288637的相對表達(dá)量為0.10±0.01，用五個(gè)肝癌細(xì)胞系分別與L02細(xì)胞系進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=12

6、.56，24.47，18.41，18.38，9.08，p＜0.05)。表明LOC100288637在肝癌細(xì)胞系中高表達(dá)。
　　3.2逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)結(jié)果顯示:在轉(zhuǎn)染siRNA后的HepG2細(xì)胞中，LOC100288637-control組和LOC100288637-siRNA組的LOC100288637表達(dá)量分別為38.97±3.98，5.12±0.15，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=14.72，p＜0.01)。表明siRNA對LO

7、C100288637的干擾效果明顯。
　　3.3 CCK-8檢測結(jié)果顯示:向HepG2細(xì)胞轉(zhuǎn)染LOC100288637 siRNA12小時(shí)和24小時(shí)后，LOC100288637-siRNA組的HepG2細(xì)胞增值活性明顯降低，而LOC100288637-control組仍保持較高的增殖活性，兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=139.80，F(xiàn)=191.40，p＜0.01)，表明LOC100288637能協(xié)助肝癌細(xì)胞的增殖。
　　3

8、.4逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)結(jié)果顯示:向HepG2細(xì)胞轉(zhuǎn)染hsa-miR-101-3p模擬物后，hsa-miR-101-3p control組和hsa-miR-101-3p mimics組LOC100288637表達(dá)量分別為1.00±0.05，0.08±0.00，兩組相比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=29.48，p＜0.05)，表明hsa-miR-101-3p能抑制LOC100288637的表達(dá)。
　　3.5熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)顯示:LO