RECK及MMP-2、MMP-9在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、背景和目的： 膀胱癌是人類最常見的惡性腫瘤之一，也是我國最常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤，其中約90﹪是膀胱移行細(xì)胞癌(bladdertransitional cdl carcinoma，BTCC)。首次診斷BTCC時(shí)約70﹪～85﹪為淺表性腫瘤，但在行保留膀胱手術(shù)治療的患者中約70﹪在第一次手術(shù)后會復(fù)發(fā)，其中約20﹪則會進(jìn)展成具有侵襲性的高度惡性腫瘤。近年來隨著對腫瘤發(fā)生分子生物學(xué)機(jī)制的深入研究，人們在BTCC的發(fā)病機(jī)制、臨床診治等方

2、面取得大量成果，但整體治療效果仍不理想。而BTCC的復(fù)發(fā)、侵襲和轉(zhuǎn)移是影響患者預(yù)后和導(dǎo)致患者死亡的主要原因，因此，除了防止腫瘤發(fā)生以外，如何減少BTCC的復(fù)發(fā)、侵襲和轉(zhuǎn)移就顯得尤為重要，也成為目前研究的熱點(diǎn)、重點(diǎn)和難點(diǎn)。 BTCC的侵襲和轉(zhuǎn)移是個(gè)涉及多階段、多步驟、多因素、多基因的復(fù)雜過程，其中最關(guān)鍵的步驟是基底膜(basement membrane，BM)的破壞和細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)的降

3、解。此過程依賴多種蛋白酶系的參與，而基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)則是其中最重要的一大酶系，對促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移起著重要作用。目前至少已發(fā)現(xiàn)26種MMPs，其中基質(zhì)金屬蛋白酶．2(matrixmetalloproteinase-2，MMP-2)和基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9，MMP-9)由于可以特異性的降解BM和ECM的主要成分Ⅳ 型膠原

4、，是MMPs家族中最重要的兩種蛋白水解酶。MMP-2和MMP-9在正常組織中表達(dá)較低，在BTCC等惡性腫瘤組織中卻呈現(xiàn)高表達(dá)。因此，抑制二者的活性能夠抑制BTCC的侵襲和轉(zhuǎn)移。RECK(reversion-inducing-cysteine-dchprotein with Kazal motifs)基因是近年來發(fā)現(xiàn)的新型MMPs抑制劑，可以在轉(zhuǎn)錄后水平至少抑制MMP-2、MMP-9及MT1-MMP等3個(gè)MMPs家族成員的表達(dá)，從而抑制腫

5、瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移。目前國內(nèi)外關(guān)于RECK基因與BTCC關(guān)系的相關(guān)研究剛剛起步，尤其是RECK與BTCC復(fù)發(fā)關(guān)系的研究，國內(nèi)外尚未見報(bào)道。本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測RECK蛋白及MMP-2蛋白、MMP-9蛋白在BTCC組織中的表達(dá)水平，并對其與腫瘤組織學(xué)分級、病理分期、是否復(fù)發(fā)等臨床病理資料之間的關(guān)系進(jìn)行分析，以探討其在BTCC的發(fā)生、發(fā)展、浸潤、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)過程中的作用以及三者之間的相互關(guān)系，評估其作為腫瘤標(biāo)志物及臨床預(yù)后指標(biāo)的應(yīng)用價(jià)值

6、，為BTCC的早期診治、預(yù)后判斷及復(fù)發(fā)檢測提供新的途徑和理論依據(jù)，也為開發(fā)新的抗腫瘤藥物提供一個(gè)新的思路。 材料與方法 收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院及第二附屬醫(yī)院泌尿外科2005年7月至2006年10月間經(jīng)病理證實(shí)、臨床資料完整的42例BTCC開放手術(shù)切除的癌組織標(biāo)本或活檢組織標(biāo)本。其中男30例，女12例；年齡32～88歲，平均59.93±12.63歲。初發(fā)24例，復(fù)發(fā)18例。按WHO病理分級標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ級11例，Ⅱ級16例，Ⅲ

7、級15例。按UICC-TNM臨床分期標(biāo)準(zhǔn)：非肌層浸潤性腫瘤(Tis,Ta,T1)23例，肌層浸潤性腫瘤(T2～T4)19例。另收集13例正常膀胱粘膜組織標(biāo)本作為對照，均取自因良性前列腺增生癥行開放手術(shù)的患者，均無腫瘤病史。用SP法免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測BTCC癌組織及正常膀胱粘膜組織中RECK蛋白及MMP-2蛋白、MMP-9蛋白的表達(dá)情況；并分析RECK蛋白、MMP-2蛋白、MMP-9蛋白的表達(dá)與BTCC患者相關(guān)臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系

8、，包括年齡、性別、組織學(xué)分級、病理分期、是否復(fù)發(fā)等。所有數(shù)據(jù)均用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，采用X<'2>檢驗(yàn)或Fisher′s精確概率檢驗(yàn)及Spearman等級相關(guān)分析進(jìn)行陽性表達(dá)率的比較分析。以α=0.05作為統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)的顯著性水準(zhǔn)。 結(jié)果： 1．RECK蛋白在正常膀胱粘膜組織中陽性表達(dá)率為84．62﹪(11/13)，而在BTCC組織中的表達(dá)陽性率為52．38﹪(22/42)，明顯低于正常膀胱粘膜組織，

9、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)；MMP-2蛋白在正常膀胱粘膜組織中陽性表達(dá)率為23．08﹪(3/13)，而在BTCC組織中的表達(dá)陽性率為73．81﹪(31/42)，明顯高于在正常膀胱粘膜組織中的表達(dá)，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)；MMP-9蛋白在正常膀胱粘膜組織中陽性表達(dá)率為30．77﹪(4/13)，而在BTCC組織中的表達(dá)陽性率為85．7l﹪(36/42)，明顯高于在正常膀胱粘膜組織中的表達(dá)，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0

10、．05)。 2．RECK蛋白在BTCC中的陽性表達(dá)率在不同年齡、性別之間無顯著性差異(P>0．05)；在高分化組(Ⅰ)RECK蛋白陽性表達(dá)率為63．64﹪(7/11)，在中分化組(Ⅱ)為56．25﹪(9/16)，在低分化組(Ⅲ)為40．oo﹪(6/15)，隨腫瘤組織學(xué)分級的增高而明顯降低。但是在高分化組(Ⅰ)和中低分化組(Ⅱ～Ⅲ)之間陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0．05)。隨著BTCC臨床病理分期的進(jìn)展，RECK蛋白的陽性表

11、達(dá)率呈明顯下降，在非肌層浸潤性BTCC(Tis，Ta,Tl)為69．57﹪(16/23)，肌層浸潤性BTCC(T2～T4)為31．58﹪(6/19)，兩組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。RECK．蛋白的陽性表達(dá)率在初發(fā)腫瘤組為70．83﹪(17/24)，在復(fù)發(fā)腫瘤組為27．78﹪(5/18)，兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。 3．MMP-2蛋白在BTCC中的表達(dá)與患者的年齡、性別無關(guān)(P>0．05)。隨腫瘤組織

12、學(xué)分級的增高M(jìn)MP-2蛋白陽性表達(dá)率明顯增高，在高分化組(Ⅰ)為45．45﹪(5/11)，在中分化組(Ⅱ)為81．25﹪(13/16)，在低分化組(Ⅲ)為86．67﹪(13/15)，且高分化組(Ⅰ)和中低分化組(Ⅱ～Ⅲ)之間陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。隨著BTCC 臨床病理分期的升高，MMP-2蛋白的陽性表達(dá)率也明顯上升，在非肌層浸潤性BTCC(Tis，Ta,T1)為56．52﹪(13/23)，肌層浸潤性BTCC(T2～

13、T4)為94．74﹪(18/19)，兩組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。MMP-2蛋白的陽性表達(dá)率在初發(fā)腫瘤組為58．33﹪(14/24)，在復(fù)發(fā)腫瘤組為94．44﹪(17/18)，兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。 4．MMP-9蛋白在BTCC中的表達(dá)與患者的年齡、性別無關(guān)(P>0．05)。隨腫瘤組織學(xué)分級的增高M(jìn)MP-9蛋白陽性表達(dá)率明顯增高，在高分化組(Ⅰ)為36.36﹪(4/11)，在中分化組(Ⅱ)為87

14、.50﹪(14/16)，在低分化組(Ⅲ)為93.33﹪(14/15)，且高分化組(Ⅰ)和中低分化組(Ⅱ～Ⅲ)之間陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。隨著BTCC臨床病理分期的升高，MMP-9蛋白的陽性表達(dá)率也呈明顯上升，在非肌層浸潤性BTCC(Tis，Ta，T1)為60.87﹪(14/23)，肌層浸潤性BTCC(T2～T4)為94.74﹪(18/19)，兩組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。MMP-9蛋白的陽性表達(dá)率在初發(fā)腫

15、瘤組為62.50﹪(15/24)，在復(fù)發(fā)腫瘤組為9444﹪(17/18)，兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 5.在42例BTCC標(biāo)本中，RECK蛋白表達(dá)與MMP-2蛋白表達(dá)成負(fù)相關(guān)(r=-0.460，P<0.05)，與MMP-9蛋白表達(dá)也成負(fù)相關(guān)(r=-0.309，P<0.05)：而MMP-2蛋白表達(dá)與MMP-9蛋白表達(dá)則成正相關(guān)(r=0.557，P<0.05)。 結(jié)論： 1.在BTCC組織中RECK.蛋白的

16、表達(dá)出現(xiàn)顯著性下降，而MMP-2蛋白、MMP-9蛋白的表達(dá)則出現(xiàn)顯著性上調(diào)，三者共同參與了BTCC的發(fā)生和發(fā)展。 2.隨著BTCC組織學(xué)分級、病理分期的增高和腫瘤復(fù)發(fā)，RECK蛋白的表達(dá)明顯降低，提示RECK的缺失可能使BTCC具有更強(qiáng)的侵襲能力，可能是BTCC發(fā)生浸潤、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的重要機(jī)制，為BTCC的預(yù)防和治療提供了一個(gè)新靶點(diǎn)；而MMP-2蛋白、MMP-9蛋白的表達(dá)卻隨著BTCC的組織學(xué)分級、病理分期的增高和腫瘤復(fù)發(fā)而顯著上