牛磺酸對(duì)氯化鎘誘導(dǎo)的孕鼠胎盤損傷及胚胎發(fā)育毒性的影響及機(jī)制的研究.pdf

1、目的： 鎘(Cadmium，Cd)是環(huán)境中廣泛存在的有毒重金屬元素之一，在人體及動(dòng)物試驗(yàn)中都被證實(shí)具有多器官、多組織毒性，其中對(duì)生殖系統(tǒng)的毒性較為敏感且影響深遠(yuǎn)。目前認(rèn)為鎘所致的氧化損傷、鎘與鈣離子的相互作用、鎘與金屬巰蛋白以及鎘對(duì)多種酶活性的抑制作用等，都可能是鎘致生殖毒性的重要機(jī)制。但國內(nèi)外對(duì)鎘的雌性生殖毒性的系統(tǒng)干預(yù)研究報(bào)道甚少。牛磺酸(Taurine，Tau)是一種由含硫氨基酸轉(zhuǎn)化而來的β-氨基酸，存在于動(dòng)物及人體細(xì)胞中

2、，具有廣泛生物學(xué)效應(yīng)，研究表明Tau可提高機(jī)體抗氧化防御體系，增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力。本實(shí)驗(yàn)通過建立染鎘孕鼠動(dòng)物模型，補(bǔ)充不同濃度Tau，觀察胎盤組織形態(tài)學(xué)改變、雌孕激素水平、胎盤e-NOS及AKP含量和胎鼠生長發(fā)育情況，系統(tǒng)研究探討了Tau對(duì)染鎘孕鼠及胎鼠的保護(hù)作用和可能機(jī)制，并對(duì)Tau的干預(yù)途徑進(jìn)行了有意義的探索，為妊娠期鎘中毒的預(yù)防和Tau資源的開發(fā)及臨床應(yīng)用提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 選擇體重240～270g的雌

3、性SD受孕大鼠50只，用隨機(jī)數(shù)字排列表分為對(duì)照組(A)、CdCl<,2>組(B)、100m/kg.dTalu組(C)、400mg/kg.dTau組(D)、800mK/kg．dTau組(E)，每組10只。按雌、雄鼠交配后發(fā)現(xiàn)陰栓的當(dāng)天為雌鼠懷孕第1天，以此計(jì)算孕期，并給予相應(yīng)處理：BCDE四組自由飲用40mg/L氯化鎘的蒸餾水，A組自由飲用蒸餾水。CDE組每日上午9：00分別按100、400、800mg/kg.d的Tau灌胃一次，AB組給

4、予等容量蒸餾水灌胃，直至孕鼠剖腹處死。于孕第1、7、14、20天稱孕鼠體重并記錄。孕鼠均于孕20天在5％利多卡因3～4ml腹腔注射麻醉下，開胸直視下心臟穿刺取血5毫升，靜置30分鐘后離心，血清于-20℃保存，放射免疫分析法測(cè)血清中雌激素(E<,2>)、孕激素(P)含量；石墨爐原子吸收法測(cè)其鎘含量。然后無菌條件下剖宮產(chǎn)每組隨機(jī)取出20個(gè)胎盤稱重后，部分置入10％甲醛固定液中，用于HE染色進(jìn)行形態(tài)觀察和免疫組化方法及圖像分析檢測(cè)e-NOS、

5、AKP的平均光密度(AOD)；部分置于4％戊二醛固定液，用于電鏡了解胎盤細(xì)微結(jié)構(gòu)。每組隨機(jī)取20只胎鼠準(zhǔn)確稱其體重，測(cè)體尾長后，在冰盤上取出胎盤及胎鼠肝臟濾紙吸干，分別稱重后低溫冰凍保存，石墨爐原子吸收法測(cè)其鎘含量。所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果均以x±S表示，采用Q檢驗(yàn)、單因素方差分析、直線相關(guān)分析等方法，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1 一般情況：染毒期間，母鼠進(jìn)食和飲水略減少，染

6、鎘后大鼠反應(yīng)遲鈍，活動(dòng)減少，喜聚堆睡覺，給予?；撬嶂委熃M大鼠狀態(tài)有所改善。 2 孕鼠體重增量的比較：鎘染毒前期各組孕鼠體重增長無明顯差別(P>0.05)。孕第14、20天時(shí)與A組比較，其它組體重增量減少，差異均有顯著性(P<0.05)；E組體重增量較B組高，差異有顯著性(P<0.05)；CD組孕鼠體重增重較B組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但有上升趨勢(shì)。 3 胎盤組織病理改變： 3．1 光鏡下觀察：B組胎盤病理學(xué)變化最明

7、顯。在迷路層及基底層可見纖維斑塊狀壞死及淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤等慢性非特異性炎癥的表現(xiàn)，絨毛結(jié)構(gòu)排列紊亂；CDE組病變較B組明顯減輕，其中E組接近A組。 3．2 電鏡下觀察：B組胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞器明顯減少，線粒體腫脹，嵴模糊、斷裂甚至融合，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)廣泛擴(kuò)張，明顯脫顆粒，微絨毛數(shù)量顯著減少，甚至缺失；染色質(zhì)聚集成塊，核膜模糊；CDE組：上述病變減輕，最早為細(xì)胞表面微絨毛從數(shù)量及形態(tài)上得以恢復(fù)，細(xì)胞器病變也有不同程度的改善。 4

8、SP免疫組化結(jié)果：胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒沉著的合體滋養(yǎng)細(xì)胞為陽性細(xì)胞，經(jīng)圖像分析測(cè)定，B組胎盤e-NOS、AKP的AOD較對(duì)照組低，差異有顯著性(P<0.01)；D、E組胎盤e-NOS、AKP的AOD較B組高，差異有顯著性(P<0.05)；C組與B組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 5孕期性激素(P、E<,2>)含量的比較：B組孕鼠P、E<,2>水平較對(duì)照組下降，差異有顯著性(P<0.01)；DE組孕鼠P、E<,2>水平較

9、B組高，差異有顯著性(P<0.01)；C組和B組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 6 孕鼠血清、胎盤組織及胎鼠肝臟中鎘含量的比較：B組孕鼠血鎘、胎盤鎘及胎鼠肝鎘含量均明顯高于A組(P<0.01)；Tau各組的血鎘、胎盤鎘含量均低于B組(P<0.05)；DE組胎鼠肝臟鎘含量明顯低于B組(P<0.01，P<0.05)。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看出，孕鼠血鎘含量與胎鼠肝臟鎘及胎盤鎘含量呈正相關(guān)性(P<0.05)。 7 胎鼠的生長發(fā)育：B組胎盤重、

10、胎鼠體重及體尾長較A組均顯著降低(P<0.01)；Tau各組胎盤重及胎鼠體重較B組有不同程度的增加(P<0.05)，但仍比A組低(P<0.05)；E組體尾長和B組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論： 1 鎘對(duì)孕鼠生殖系統(tǒng)有毒性作用：胎盤結(jié)構(gòu)發(fā)生損傷；胎盤相關(guān)酶含量減少；胎盤分泌的雌、孕激素水平下降，生殖內(nèi)分泌功能發(fā)生紊亂。進(jìn)一步明確了胎盤是鎘的靶器官之一。 2 胎盤結(jié)構(gòu)與功能受損致胎盤屏障作用下降，鎘引起胚胎發(fā)