骨髓間充質干細胞在腫瘤中的分化及超聲測定前列腺突入的臨床應用.pdf

1、一、骨髓間充質干細胞體外分化為肌纖維母細胞的研究 目的:探討腫瘤微環(huán)境對骨髓間充質干細胞（MSCs）的趨化性以及MSCs在腫瘤微環(huán)境中分化為肌纖維母細胞的體外研究。 方法;于雄性新西蘭大白兔股骨大轉子處抽取骨髓約1ml，采用密度梯度離心法聯(lián)合貼壁培養(yǎng)法分離擴增MSCs，用流式細胞儀檢測培養(yǎng)的MSCs的表面抗原。無菌方法摘取VX2瘤兔的新鮮腫瘤組織進行原代培養(yǎng)擴增，并收集其培養(yǎng)上清。采用Transwell法比較對照組、體積

2、分數(shù)為30％和50％的VX2上清培養(yǎng)基對F2代MSCs的趨化性；根據(jù)Transwell結果，將F2代MSCs用體積分數(shù)為30％VX2上清培養(yǎng)基刺激，分別在7天、14天時采用RT-PCR和Westernblot方法檢測肌纖維母細胞標記物α-SMA和Vimentin的表達情況。 結果:MSCs細胞呈梭形，培養(yǎng)的F2代MSCs流式鑒定結果為CD29（+），CD44（+），CD45（-），CD106（+）； VX2細胞呈多邊形或長梭形；

3、Transwell試驗中發(fā)現(xiàn)：鏡下體積分數(shù)為30％VX2上清組穿過基質膠的細胞數(shù)明顯多于對照組和50％組，這一結果被隨后進行的比色測定結果進一步證實；RT-PCR和Westernblot結果均發(fā)現(xiàn)：用30％VX2上清培養(yǎng)基刺激7天后，MSCs表達α-SMA和Vimentin的水平均明顯強于對照組（P<0.05）；而刺激14天后，MSCs表達α-SMA和Vimentin的水平均進一步增強（P<0.05）。 結論:腫瘤微環(huán)境對MSC

4、s有一定的趨化性，MSCs可以在腫瘤微環(huán)境的刺激下分化為肌纖維母細胞。 意義:本實驗在一定程度上表明：在腫瘤微環(huán)境的誘導下，MSCs能夠進入腫瘤組織并在其刺激下轉化為肌纖維母細胞，這可能是MSCs促進腫瘤發(fā)生發(fā)展的一個途徑；MSCs可能是腫瘤/癌活化肌纖維母細胞的一個重要來源。 二、骨髓間充質干細胞在腫瘤微環(huán)境中分化為血管內皮細胞的研究 目的:探討骨髓間充質干細胞（MSCs）在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用及其是否可以

5、轉化為血管內皮細胞。 方法:隨機將20只雄性新西蘭大白兔分為2組：實驗組和對照組。每只動物抽取骨髓培養(yǎng)MSCs后，采用VX2瘤塊包埋法建立膀胱腫瘤模型。模型建立1周后，實驗組回輸DAPI標記的自身F2代MSCs，而對照組回輸培養(yǎng)液。在模型建立2、4周后分別用經腹超聲方法檢測腫瘤大小。4周后處死所有動物，采用雙重免疫熒光方法檢測實驗組中植入的MSCs能否轉化為血管內皮細胞。另外，將實驗組和對照組膀胱腫瘤標本做成石蠟切片，每個動物隨

6、機抽取3張，HE染色后，計數(shù)高倍視野下（×400）血管數(shù)目，比較兩組動物腫瘤組織血管密度的差異。體外實驗中原代培養(yǎng)MSCs和VX2細胞，收集新鮮VX2上清，實驗組是用體積分數(shù)為10％胎牛血清、30％VX2上清的低糖DMEM培養(yǎng)的F2代MSCs，對照組是用體積分數(shù)為10％胎牛血清的低糖DMEM培養(yǎng)的F2代MSCs，分別在7天、14天時采用Westernblot方法比較兩組細胞血管內皮細胞標記物CD146的蛋白表達情況。 結果:實驗

7、組和對照組在2周時腫瘤最大徑分別是0.77±0.15cm和0.71±0.15cm，兩組間沒有明顯統(tǒng)計學差異（P>0.05）。4周時實驗組腫瘤最大徑（3.82±0.94cm）明顯大于對照組（2.28±0.54cm）（P<0.05）。實驗組冰凍切片顯示DAPI/CD146雙重免疫熒光陽性的細胞存在于血管腔表面，表明植入的MSCs已轉化為血管內皮細胞。實驗組和對照組的腫瘤組織血管密度分別是10.1±0.70/0.2m㎡和8.24±0.81/0

8、.2m㎡，兩組間存在明顯統(tǒng)計學差異（P<0.05）；體外實驗中Westernblot結果發(fā)現(xiàn)：實驗組的MSCs用體積分數(shù)30％VX2上清培養(yǎng)基刺激7天后，CD146的蛋白表達水平明顯強于對照組（P<0.05）；而刺激14天后，CD146蛋白表達水平進一步增強（P<0.05）。 結論:MSCs能夠在腫瘤微環(huán)境中分化為血管內皮細胞，促進血管生成，這可能是其促進腫瘤發(fā)生發(fā)展的主要途徑。 三、超聲測定膀胱內前列腺突入在良性前列腺

9、增生患者中的應用 目的:探討良性前列腺增生（BPH）患者膀胱內前列腺突入（IPP）程度測定對膀胱出口梗阻及膀胱功能的預測與評價。 方法:分析206例初次就診的良性前列腺增生患者的資料，根據(jù)經腹超聲測量的IPP值將患者分為兩組：明顯突入組（IPP>1cm）和不明顯突入組（IPP≤1cm），分析兩組間臨床資料及尿動力學檢查結果間的關系。 結果:臨床資料顯示：明顯突入組（sIPP）和不明顯突入組（nsIPP）患者在前列

10、腺體積（73.7±35.9cm3 vs62.8±36.5 cm3）、前列腺特異性抗原（PSA）（1.81±0.67ng/mlvs1.64±0.36 ng/ml）、剩余尿量（290.2±217.2ml vs228.2±167.9ml）、急性尿潴留（33.3％ vs18.0％）及膀胱小梁化（23.1％ vs11.7％）五個方面的差異均有明顯統(tǒng)計學意義（P<0.05）。尿動力學檢查結果顯示：兩組患者的排尿期最大尿流率（Qmax）（7.6±4.

11、1ml/s vs9.1±3.6ml/s）、膀胱過度活動癥發(fā)生率（82.1％ vs17.2％）、膀胱順應性降低率（35.9％ vs12.5％）、最大逼尿肌壓力（Pdet.max）（109.8±84.9cmH2O vs84.9±44.1 cmH2O）及膀胱出口梗阻指數(shù)（BOOI）（75.2±27.1 vs65.9±34.6）間的差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。 結論:IPP可以作為初步預測和評價膀胱出口梗阻程度及膀胱功能的一項指