Periostin在DN大鼠腎間質(zhì)纖維化進(jìn)展中的調(diào)控機(jī)制.pdf

1、 目的：通過(guò)纈沙坦聯(lián)合還原型谷胱甘肽對(duì)糖尿病腎病 SD 大鼠干預(yù),測(cè)定血漿 AngⅡ、VEGF、血液流變學(xué)及腎臟組織Ⅲ膠原的表達(dá),驗(yàn)證這些指標(biāo)之間與腎臟組織損害程度的關(guān)系；通過(guò)纈沙坦干預(yù)在體外高糖環(huán)境下培養(yǎng)的HK-2細(xì)胞,測(cè)定Periostin、AP-1來(lái)探討腎小管上皮細(xì)胞在轉(zhuǎn)分化后腎間質(zhì)纖維化形成的機(jī)制。方法：1)通過(guò)予以60毫克/千克鏈脲佐菌素制作糖尿病大鼠模型,分為以下五組,正常對(duì)照組(Control),模型組(DM),纈沙坦干

2、預(yù)組(V)、還原型谷胱甘肽干預(yù)組(GSH)、纈沙坦聯(lián)合還原型谷胱甘肽干預(yù)組(V&GSH),持續(xù)給藥干預(yù)治療8week后,包埋切片并HE染色檢測(cè)DN大鼠腎組織病理變化；腹主動(dòng)脈采血行血液流變學(xué)檢測(cè)；以酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法行AngⅡ和VEGF的測(cè)定；免疫組化方法測(cè)定Ⅲ型膠原表達(dá)。2)將體外培養(yǎng)的HK-2細(xì)胞分成：正常對(duì)照組(a)、高糖組(b)、纈沙坦組(c)。每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔,分別用相應(yīng)的藥物干預(yù)48 h后收集細(xì)胞和培養(yǎng)液。CKK-8檢測(cè)細(xì)胞增

3、殖和毒性；免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)AP-1表達(dá)；RT-PCR檢測(cè)Periostin和AP-1的mRNA表達(dá)。結(jié)果：1)①M(fèi)asson和HE染色觀察：與正常組比較,模型組(DM)腎小管表現(xiàn)有一定的擴(kuò)張變寬,腎間質(zhì)有大量被深染為藍(lán)色的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),纖維比較化明顯。與模型組相比纈沙坦組(Val)組和纈沙坦聯(lián)合還原型谷胱甘肽組(Val&GSH)組腎小管稍增寬,比較少的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、沒(méi)有纖維化改變。②血液流變學(xué)檢測(cè)結(jié)果：與正常對(duì)照(Control)相比

4、,糖尿病腎病模型組(DN)血液流變學(xué)指標(biāo)明顯增高(P<0.05)；與糖尿病腎病模型組(DN)相比,纈沙坦(V)、還原型谷胱甘肽組( GSH )、纈沙坦聯(lián)合還原型谷胱甘肽干預(yù)組(V&GSH)均能改善糖尿病腎病大鼠的血液流變學(xué)指標(biāo)(P<0.05)③ELISA檢測(cè)結(jié)果顯：與正常對(duì)照組(Control)相比,糖尿病模型組(DN)血漿中AngⅡ和VEGF升高(P<0.05)；與糖尿病腎病模型組(DN)相比,纈沙坦(V)、還原型谷胱甘肽組( GSH

5、 )、纈沙坦聯(lián)合還原型谷胱甘肽干預(yù)組(V&GSH)血漿中AngⅡ和VEGF明顯降低(P<0.05)。2) CKK-8檢測(cè)顯示高糖組細(xì)胞增殖性最強(qiáng)(P<0.05)；免疫組化法：Ⅲ型膠原黃色物質(zhì)的表達(dá)情況,高糖組(b)與正常對(duì)照組相比顯著升高(P<0.05),纈沙坦(c)組與模型組(b)相比顯著降低(P<0.05)；RT-PCR結(jié)果表明,與比正常對(duì)照組相比,Periostin及AP-1 mRNA在高糖組(b)中大量表達(dá)(P<0.05),纈沙