LIM礦化蛋白-1對脊柱韌帶骨化作用的實驗研究.pdf

1、脊柱韌帶組織一般由成纖維細胞構成，成纖維細胞能分泌膠原及粘多糖等一些物質。脊柱韌帶組織在生理狀態(tài)下呈一種動態(tài)與靜態(tài)平衡，一般不會向骨化方向進展。但在某些因子刺激下，成纖維細胞具有向成骨細胞分化的能力，并具有成骨細胞分泌功能。LIM礦化蛋白-1(LIM mineralization protein1，LMP-1)是一種細胞內的非分泌蛋白，在胚胎骨發(fā)育及骨細胞的分化過程中起著重要作用，是一種正調節(jié)因子，其表達量的改變能影響骨細胞的生長及分化

2、，與異位成骨等多種骨性疾病有著密切的聯(lián)系。研究顯示:LMP-1可由多種細胞分泌，為細胞內信號轉導分子，其直接作用于細胞核，啟動相關基因片段發(fā)揮生物學作用。根據(jù)胚胎細胞分化及發(fā)育研究表明，骨組織與牙本質具有相同的起源，LMP-1在骨組織和牙本質的細胞分化、細胞外基質的分泌和礦化過程中有重要的作用，與成骨及牙本質骨化等過程密切相關。LMP-1可能對骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMPs)及Runx2具有調控作用，在骨化及異位成骨具有重要的作用，但其調控機

3、制尚不明了。本課題采用免疫組織化學染色及RT-PCR技術測定LMP-1及mRNA在頸椎后縱韌帶中的表達水平，探索LMP-1對成骨調控作用的分子生物學機制。
　　目的:
　　1、分析頸椎后縱韌帶骨化患者與非頸椎后縱韌帶骨化患者的后縱韌帶中LMP-1水平表達差異，探討LMP-1對韌帶骨化調控作用的分子生物學機制;
　　2、檢測LMP-1在脊柱韌帶組織中原位分布情況，探討LMP-1在脊柱韌帶骨化病中的發(fā)病機制。
　　方

4、法:
　　1、標本的選取:根據(jù)患者的臨床癥狀、影像學檢查證明為頸椎后縱韌帶骨化患者16例標本作為實驗組;以脊髓外傷或術前影像學證明非骨化手術入路切取的頸椎后縱韌帶患者20例標本為對照組。
　　2、應用RT-PCR技術對實驗組16例OPLL標本及對照組20例非OPLL標本行mRNA檢測，每個標本以待測基因與內參基因灰度值的比值為計算參數(shù)，所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差（(x)±s）表示，兩組數(shù)據(jù)問采用獨立樣本t檢驗，應用SPSS19

5、.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。
　　3、運用免疫組織化學染色方法對兩者標本進行染色，以抗LMP-1單抗為一抗，以SABC法為實驗步驟，DAB顯色，顯微鏡下觀察標本顆粒有無情況，IPP6.0圖像分析軟件測定Tryptase的表達。每張切片電鏡下放大200倍，隨機取3～5個測量視野，測量后縱韌帶Tryptase平均光密度值(OD)，然后取其平均值。所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差（(x)±s）表示，兩組數(shù)據(jù)間采用獨立樣本t檢驗，應用SPS