大鼠骨骼肌缺血再灌注損傷引起遠(yuǎn)隔腎組織中組織間粘附分子-1(ICAM-1)表達(dá)的影響及作用機(jī)制探討.pdf

1、目的:
　　 1、通過(guò)觀察大鼠骨骼肌缺血再灌注損傷后骨骼肌組織變化情況探討骨骼肌缺血再灌注損傷的作用機(jī)制，為臨床預(yù)防和治療骨骼肌缺血再灌注損傷提供理論依據(jù);
　　 2、通過(guò)觀察大鼠骨骼肌缺血再灌注損傷中遠(yuǎn)隔腎臟中組織間粘附分子-1的表達(dá)情況，探討骨骼肌缺血再灌注損傷引起遠(yuǎn)隔腎損傷的作用機(jī)制，并為臨床預(yù)防和治療骨骼肌缺血再灌注損傷腎損傷提供理論依據(jù)。
　　 缺血再灌注(ischemia reperfusion，IR

2、)是臨床工作中經(jīng)常遇到的一種現(xiàn)象。Mccord在1985年就對(duì)缺血再灌注的概念進(jìn)行了較為全面的定義，并得到了廣泛的認(rèn)同。缺血再灌注損傷在臨床上多發(fā)生于斷肢再植、運(yùn)動(dòng)損傷及創(chuàng)傷、骨筋膜間隙綜合征、動(dòng)脈栓塞取栓后、應(yīng)用止血帶時(shí)間過(guò)長(zhǎng)后等等，是指由于各種原因引起的機(jī)體組織或器官低血液灌注甚至無(wú)血液灌注一定時(shí)間后，血液灌注恢復(fù)的過(guò)程。由于組織器官缺血缺氧引起的損傷及血液灌注恢復(fù)后組織器官的功能和結(jié)構(gòu)不但不能得到恢復(fù)，反而加重其損傷的現(xiàn)象稱為缺血

3、再灌注損傷。骨骼肌被認(rèn)為是四肢中對(duì)缺血最敏感的組織。而且由于缺血再灌注損傷在發(fā)生缺血再灌注的組織器官可發(fā)生，遠(yuǎn)隔的器官也因?yàn)檠踝杂苫尫?、中性粒?xì)胞激活以及炎性細(xì)胞因子的釋放等機(jī)制被被損傷，所以嚴(yán)重的骨骼肌缺血再灌注損傷可致肢體壞死、截肢、其他器官的功能衰竭甚至死亡，因此對(duì)骨骼肌缺血再灌注損傷的作用機(jī)理、臨床預(yù)防、治療的研究有著深遠(yuǎn)的臨床意義。
　　 近年來(lái)，對(duì)于缺血再灌注損傷作用機(jī)制，眾多學(xué)者已做了大量的研究，隨著研究的逐漸深

4、入，氧自由基、鈣超載、無(wú)復(fù)流現(xiàn)象及中性粒細(xì)胞的作用等逐漸為人們所接受。本實(shí)驗(yàn)期望通過(guò)對(duì)骨骼肌缺血再灌注損傷引發(fā)的遠(yuǎn)隔腎組織中ICAM-1的表達(dá)情況的觀察，探討骨骼肌缺血再灌注損傷引發(fā)遠(yuǎn)隔腎損傷的相關(guān)作用機(jī)制。
　　 方法:
　　 選擇健康清潔級(jí)成年SD大鼠27只，體重150-200g，隨機(jī)分成兩組:
　　 ①對(duì)照組(n=14):常規(guī)麻醉7小時(shí)后處死取材;
　　 ②實(shí)驗(yàn)組(n=13)按照1ml/100g腹腔

5、注射3％戊巴比妥鈉常規(guī)麻醉后，阻斷帶阻斷右后肢血流3小時(shí)，松解阻斷再灌注4小時(shí)后取材。
　　 取骨骼肌組織采用HE染色，石蠟切片后光鏡下觀察組織形態(tài)的改變，取右腎組織，石蠟切片后免疫組織化學(xué)染色，觀察ICAM-1在腎組織的表達(dá)情況;陽(yáng)性細(xì)胞采用專業(yè)圖像分析軟件Image-Pro Plus6.0測(cè)定平均光密度值。用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS13.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)取P＜0.05。
　　 結(jié)果:
　

6、　 1、骨骼肌組織HE染色結(jié)果:對(duì)照組:骨骼肌組織形態(tài)學(xué)正常;實(shí)驗(yàn)組:肌纖維排列紊亂，肌細(xì)胞腫脹明顯，細(xì)胞間隙明顯增寬，間質(zhì)明顯水腫，間質(zhì)毛細(xì)血管擴(kuò)張充血，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，部分肌纖維溶解、壞死。
　　 2、免疫組織化學(xué)染色結(jié)果:對(duì)照組腎組織形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，腎小球細(xì)胞內(nèi)ICAM-1弱陽(yáng)性表達(dá)，腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)ICAM-1陽(yáng)性表達(dá);對(duì)照組腎小球及腎小管上皮細(xì)胞明顯腫脹，間質(zhì)水腫，可見(jiàn)腎小管上皮細(xì)胞部分變性，凋亡，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，腎小

7、球及腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)ICAM-1強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。實(shí)驗(yàn)組免疫陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值為(0.0252±0.0016)，對(duì)照組免疫陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值為(0.01581±0.0013)。同對(duì)照組相比較，實(shí)驗(yàn)組明顯大于對(duì)照組平均光密度值，結(jié)果顯示有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、在本實(shí)驗(yàn)所設(shè)定的條件下，原位骨骼肌組織確實(shí)發(fā)生了缺血、缺氧及其它病理性改變;
　　 2、骨骼肌缺血再灌注損傷確實(shí)引起了腎臟的

8、損傷;
　　 3、骨骼肌缺血再灌注后腎組織中ICAM-1表達(dá)的增加提示ICAM-1參與了骨骼肌缺血再灌注腎損傷;
　　 4、本實(shí)驗(yàn)中并未發(fā)現(xiàn)明顯腎小管管型的存在，不排除與骨骼肌缺血時(shí)間或再灌注時(shí)間較短有關(guān)的可能;
　　 5、本實(shí)驗(yàn)中可見(jiàn)局部中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)及部分細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞核固縮、凋亡，提示中性粒細(xì)胞及細(xì)胞凋亡在骨骼肌缺血再灌注損傷中發(fā)揮作用;
　　 6、骨骼肌缺血再灌注腎損傷的具體作用機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。