組織因子微顆粒檢測(cè)方法的建立及其在惡性血液系統(tǒng)疾病中的研究.pdf

1、目的：(1)建立流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)組織因子微顆粒(TF+MPs)的實(shí)驗(yàn)方法。(2)探討血栓性疾病及合并出凝血異常的急性早幼粒細(xì)胞白血病(APL)患者血漿中TF+MPs的變化趨勢(shì)和臨床意義。(3)研究TF+MPs及內(nèi)皮細(xì)胞微顆粒(EMPs)與異基因造血干細(xì)胞移植(allo-HSCT)早期并發(fā)癥的相關(guān)性，尋找移植后血栓性并發(fā)癥的早期診斷指標(biāo)。
　　 方法：(1)FCM檢測(cè)微顆粒方法的建立：抽取空腹靜脈血，枸櫞酸鈉抗凝(1:9)

2、，以藻紅蛋白標(biāo)記的組織因子(TF)特異性熒光抗體CD142（CD142-PE）標(biāo)記TF，藻紅蛋白標(biāo)記的內(nèi)皮細(xì)胞特異性熒光抗體CD62E（CD62E-PE）標(biāo)記內(nèi)皮細(xì)胞，0.8μm的標(biāo)準(zhǔn)微球設(shè)定前向檢測(cè)區(qū)，界定直徑大小在0～0.8μm之間，F(xiàn)CM檢測(cè)這兩種微顆粒的絕對(duì)計(jì)數(shù)。(2)收集我院20例血栓性疾病患者及25例初治APL患者治療前后的血漿標(biāo)本，F(xiàn)CM檢測(cè)TF+MPs在血栓性疾病患者，合并顯性彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)的APL患者中的變

3、化。(3)我院91例allo-HSCT患者入組研究，根據(jù)移植后首先出現(xiàn)的并發(fā)癥情況分為四組：急性移植物抗宿主病(aGVHD)組27例、血栓組6例、感染組41例和平穩(wěn)組17例，采集患者移植預(yù)處理前、預(yù)處理結(jié)束、造血重建、造血重建后1周及造血重建后2周5個(gè)不同時(shí)間段內(nèi)的血漿標(biāo)本，以FCM檢測(cè)TF+MPs和EMPs，動(dòng)態(tài)觀察TF+MPs和EMPs在整個(gè)allo-HSCT過程中的變化及意義?；仡櫺苑治鲞@兩種微顆粒指標(biāo)與移植后血栓病變、aGVHD

4、及感染之間的關(guān)系。
　　 結(jié)果：(1)20例血栓性疾病患者TF+MPs（123.28±197.03/μL）明顯高于20例正常對(duì)照組（33.27±16.14/μL）(P＜0.05)，25例APL患者治療前TF+MPs(75.24±104.58/μL)亦高于正常對(duì)照組(P＜0.05)，經(jīng)過誘導(dǎo)治療緩解后TF+MPs水平(34.24±25.20/μL)明顯下降(P＜0.01)。在這25例APL患者中，18例合并顯性DIC患者的TF+M

5、Ps水平在治療前后有明顯差異(P＜0.05)，余下7例APL患者治療前后的TF+MPs水平未見明顯變化(P＞0.05)。(2)異基因HSCT患者預(yù)處理前TF+MPs和EMPs水平分別較正常對(duì)照組明顯升高(P＜0．01)，隨后在各個(gè)時(shí)間段雖然呈現(xiàn)不同的波動(dòng)，但沒有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。血栓組中的TF+MPs和EMPs水平在各個(gè)時(shí)間段與aGVHD組、感染組和平穩(wěn)組相比均有明顯差異(P＜0.05)，但aGVHD組、感染組和平穩(wěn)組各

6、組間的TF+MPs和EMPs水平未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。發(fā)生aGHVD、血栓和感染時(shí)，TF+MPs和EMPs水平在血栓組中升高明顯，升高水平大于aGVHD組和感染組(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：(1)采用FCM可以檢測(cè)TF+MPs，可對(duì)血栓性疾病的診斷提供幫助，并能對(duì)APL中出現(xiàn)顯性DIC狀況與疾病預(yù)后做出評(píng)估。(2)血漿TF+MPs和EMPs水平的增高可能是移植后相關(guān)血栓病變的特異性指標(biāo)，提示肝靜脈閉塞病(HVOD)