HLA-B27mRNA表達(dá)水平、基因多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎關(guān)系的研究.pdf

1、強(qiáng)直性脊柱炎(ankylosing spotldylitis，AS)是一種類(lèi)風(fēng)濕因子陰性，累及中軸關(guān)節(jié)和肌腱韌帶骨附著點(diǎn)的慢性炎癥性疾病，可引起腰痛、晨僵、脊柱活動(dòng)受限、駝背畸形、外周關(guān)節(jié)受累、足跟痛等關(guān)節(jié)癥狀以及前葡萄膜炎或虹膜炎、心血管表現(xiàn)、肺部表現(xiàn)、骨質(zhì)疏松等關(guān)節(jié)外癥狀。目前，認(rèn)為遺傳因素與該病關(guān)系尤為密切，其中HLA-B27又與之尤為密切。目前對(duì)HLA-B27的檢測(cè)方法眾多，但都存在一定的缺陷或局限性，且無(wú)法對(duì)AS進(jìn)行確診。信使

2、核糖核酸(MessengerRNA，mRNA)為由脫氧核糖核酸(DNA)轉(zhuǎn)錄合成的帶有遺傳信息的一類(lèi)單鏈核糖核酸(RNA)，它在核糖體上作為蛋白質(zhì)合成的模板，決定肽鏈的氨基酸排列順序，與遺傳性疾病的發(fā)生與表達(dá)密切相關(guān)。據(jù)國(guó)外有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，強(qiáng)直性脊柱炎患者HLA-B27mRNA有著較高的表達(dá)水平，且與強(qiáng)直性脊柱炎疾病活動(dòng)指數(shù)(BASDAI)密切相關(guān)，因此我們認(rèn)為采用定量PCR檢測(cè)HLA-B27mRNA表達(dá)可能成為珍斷AS的另一重要途徑。我

3、們對(duì)22例HLA-B27陽(yáng)性AS患者，5例HLA-B27陰性患者，22例HLA-B27陽(yáng)性正常人外周靜脈血進(jìn)行了HLA-B27mRNA表達(dá)水平檢測(cè)，以期進(jìn)一步得到之間的聯(lián)系。此外，我們還采用DNA測(cè)序儀對(duì)HLA-B27陽(yáng)性AS患者血標(biāo)本進(jìn)行B27分子亞型的檢測(cè)，以進(jìn)一步研究mRNA的表達(dá)與B27分子亞型之間的聯(lián)系。 實(shí)驗(yàn)中我們首先對(duì)門(mén)診和病房中可疑AS患者以及AS患者家族成員進(jìn)行外周靜脈血HLA-B27分子的流式細(xì)胞儀的檢測(cè)，并

4、結(jié)合臨床癥狀確診22例HLA-B27陽(yáng)性AS患者，5例HLA-B27陰性患者，22例HLA-B27陽(yáng)性正常人，并篩選20例HLA-B27陰性正常人外周靜脈血作為對(duì)照組。然后對(duì)實(shí)驗(yàn)對(duì)象外周靜脈血進(jìn)行Total RNA提取，并用RT-PCR試劑盒對(duì)Total RNA進(jìn)行HLA-B27片段反轉(zhuǎn)錄及mRNA表達(dá)水平的相對(duì)定量。此外我們對(duì)HLA-B27陽(yáng)性AS患者進(jìn)行DNA提取，經(jīng)PCR擴(kuò)增后在DNA測(cè)序儀上進(jìn)行了HLA-B27的DNA測(cè)序，與已

5、知的B27亞型序列進(jìn)行比對(duì)，得到標(biāo)本的亞型。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，以20例HLA-B27陰性對(duì)照組測(cè)出的HLA-B27mRNA平均表達(dá)水平作為參照(即表達(dá)水平為1)，22例HLA-B27陽(yáng)性AS忠者HLA-B27mRNA表達(dá)水平最低值為1.16，最高值為37.01，均值為7.77，其中B2704 12例，B270510例，分別為54.5％和45.5％，與文獻(xiàn)報(bào)道接近；22例HLA-B27陽(yáng)性正常人組，最低值為1.05，最高值為2.10

6、，均值為1.51；以及5例HLA-B27陰性患者，HLA-B27mRNA表達(dá)水平的均值為1.19。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示HLA-B27 mRNA的表達(dá)水平與強(qiáng)直性脊柱炎患者疼痛程度密切相關(guān)，HLA-B27陽(yáng)性AS患者組HLA-B27mRNA表達(dá)水平顯著高于HLA-B27陽(yáng)性正常人組和HLA-B27陰性對(duì)照組，且與亞型無(wú)特異性相關(guān)。對(duì)比分析HLA-B27陽(yáng)性AS組與HLA-B27陽(yáng)性正常組流式細(xì)胞儀檢測(cè)的熒光強(qiáng)度，結(jié)果顯示，兩者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0

7、.16>0.05)。5例HLA-B27陰性AS患者HLA-B27mRNA表達(dá)水平均值為1.19，接近于B27陰性正常人對(duì)照組。因此我們認(rèn)為采用定量PCR檢測(cè)HLA-B27mRNA表達(dá)水平可作為輔診AS的另一種重要檢測(cè)方法，特別是在鑒別HLA-B27陽(yáng)性正常人與HLA-B27陽(yáng)性患者方面有著較明顯的作用，同時(shí)檢測(cè)HLA-B27 mRNA的表達(dá)水平，可以成為另一種考察患者病情的確實(shí)有效的方法。此外，5例HLA-B27陰性患者測(cè)得的HLA-B