HLA-B27、PDCD-1、IL-23R基因多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎的相關(guān)性研究.pdf

1、強(qiáng)直性脊柱炎(Ankylosing Spondylitis, AS)是一種與免疫相關(guān)的復(fù)雜疾病，受遺傳和環(huán)境等多種因素的共同影響。多個(gè)研究顯示遺傳因素在AS發(fā)病中起著十分重要的作用。
　　 位于6號(hào)染色體短臂上的人類主要組織相容性符合體 (major histocompatibility complex，MHC)是與AS相關(guān)的主要遺傳位點(diǎn)。MHCⅠ編碼的人類白細(xì)胞抗原B27 (human leukocyte antigen-B2

2、7，HLA-B27)是迄今所知的、與疾病相關(guān)中最強(qiáng)的HLA抗原。全基因組掃描發(fā)現(xiàn)除HLA-B27基因外，還有其他的非MHC基因參與AS的發(fā)病機(jī)制，由于AS屬于自身免疫性疾病范疇，一些和免疫相關(guān)基因與疾病的關(guān)聯(lián)性研究，已成為研究AS遺傳背景的一大亮點(diǎn)，例如白介素 (interleukin，IL)基因、程序性凋亡(programmed cell death，PDCD)基因等。然而受多種因素影響，造成這些研究結(jié)果并不完全一致，尤其是各種基因單

3、核苷酸多態(tài)性 (single nucleotide polymorphisms，SNP)與AS的關(guān)系尚未完全澄清，有待進(jìn)一步研究。
　　 本課題首先采用聚合酶鏈反應(yīng)-序列特異性引物(polymerase chain reaction-se-quence-specific primer, PCR-SSP)法研究了中國(guó)湖北地區(qū)HLA-B27基因亞型與AS的相關(guān)性，然后再應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性內(nèi)切酶片段長(zhǎng)度多態(tài)性 (polymera

4、se chain reaction-restriction fragment length polymorphisms，PCR-RFLP)技術(shù)對(duì)PDCD-1基因的3個(gè)SNP進(jìn)行了AS疾病的關(guān)聯(lián)研究，最后，應(yīng)用meta分析探討了白介素-23受體（interleukin-23 receptor，IL-23R）基因中10個(gè)SNP與AS的相關(guān)性。本研究共分以下三部分：
　　 第一部分 HLA-B27基因亞型與強(qiáng)直性脊柱炎的易感性研究

5、r>　　 目的：分析在中國(guó)湖北地區(qū)HLA-B27基因亞型與AS的相關(guān)性，探討HLA-B27基因亞型在AS發(fā)病中的作用，同時(shí)評(píng)價(jià)HLA-B27基因亞型檢測(cè)的臨床意義。
　　 方法：收集HLA-B27陽性的研究對(duì)象共346例。其中AS患者190例，男129名，女61名，平均年齡(39±9)歲，健康對(duì)照者156名，來男81名，女75名，平均年齡(30±11)歲。采用病例對(duì)照研究方案，通過PCR-SSP進(jìn)行HLA-B27基因亞型檢測(cè)。

6、
　　 結(jié)果：共檢出6種亞型，分別是B*2702、B*2703、B*2704、B*2705、B*2706及B*2713。在AS患者與健康對(duì)照組中，都以B*2704亞型（72.1％和56.4％）為主，其次為B*2705亞型（21.6％和31.4％）,兩組中均檢測(cè)到頻率較低的B*2702亞型（0.5％和1.3％）及B*2703亞型（5.3％和8.3％），而B*2713亞型只在AS組測(cè)到1例（0.5％），B*2706亞型只在健康對(duì)照組

7、測(cè)到4例（2.6％）。AS患者組與健康對(duì)照組相比，盡管B*2703及B*2705亞型在對(duì)照組頻率較高，但兩組間的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.301，P﹥0.05；χ2=4.032，P﹥0.05），OR值和95％可信區(qū)分別為為0.611和0.601，0.262-0.701和0.371-0.937。B*2704亞型在兩組中所占比例均為最高且組間存在顯著性差異（χ2=9.279，P﹤0.01），OR值為1.997，95％可信區(qū)為1.279-

8、3.119，顯示B*2704亞型與AS發(fā)病危險(xiǎn)度相關(guān)。
　　 結(jié)論：中國(guó)湖北地區(qū)人群中B*2704和B*2705為主要亞型，其中B*2704與AS呈強(qiáng)相關(guān)，B*2706可能與AS呈負(fù)相關(guān)，其他低頻率基因亞型與AS的相關(guān)性有待進(jìn)一步探討，HLA-B27基因亞型可作為AS早期診斷的重要參考指標(biāo)。另外本研究所使用的PCR-SSP法能檢測(cè)出29個(gè)HLA-B27亞型（B*2701-B*2730，B*2722除外），能滿足當(dāng)前對(duì)HLA-B2

9、7基因亞型檢測(cè)的需要。
　　 第二部分 PDCD-1基因多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎的關(guān)聯(lián)研究
　　 目的：分析PDCD-1基因SNP在AS患者與健康對(duì)照人群中的分布，比較兩組人群分布差異，探討PDCD-1基因多態(tài)性與AS易感性的關(guān)聯(lián)，以期對(duì)深入研究AS的病因、發(fā)病機(jī)制提供一些理論依據(jù)。
　　 方法：采用病例對(duì)照研究方案，收集408名研究對(duì)象的血標(biāo)本，其中包含216名AS患者標(biāo)本。通過PCR-RFLP技術(shù)對(duì)PDCD-1基

10、因的3個(gè)SNP位點(diǎn)(rs11568821，rs2227981，rs2227982)進(jìn)行分型，χ2檢驗(yàn)比較患者組及對(duì)照組基因型和等位基因頻率的分布差異，運(yùn)用SHESIS在線軟件進(jìn)行LD和基因相關(guān)性分析。
　　 結(jié)果：位點(diǎn)一（rs11568821)在所有AS患者和健康對(duì)照組中僅發(fā)現(xiàn)GG純合子基因型，呈非多態(tài)性；位點(diǎn)二 (rs2227981)在AS患者和健康對(duì)照組中均檢出CC純合子、CT雜合子和TT純合子三種基因型，但在兩組中該位點(diǎn)基

11、因型和等位基因分布頻率相近，χ2檢驗(yàn)差異無顯著性（P=0.145）；位點(diǎn)三 (rs2227982)在AS患者和健康對(duì)照組中均檢出TT純合子、CT雜合子和CC純合子三種基因型，且基因型和等位基因分布頻率在兩組中具有顯著性差異（P=0.025），AS患者組具有更高的CT雜合子基因型（P=0.026, OR=1.542, 95％ CI=1.051-2.261）和T等位基因的頻率（P=0.004, OR=1.553, 95％ CI=1.144-

12、2.109）。運(yùn)用SHESIS在線軟件分析rs2227981和rs2227982，發(fā)現(xiàn)兩者存在較強(qiáng)程度連鎖(D'=0.729)；在該兩個(gè)位點(diǎn)構(gòu)建了4種單體型，CT單體型的頻率在AS患者組 (21.6％) 高于健康對(duì)照組 (13.9％) （P=0.002, OR=1.712, 95％ CI=1.222-2.397)，CC單體型在健康對(duì)照組 (57.1％) 比AS患者組(44.6％)更普遍（P=0.000, OR=0.603, 95％ CI

13、=0.467-0.780)。
　　 結(jié)論：在中國(guó)漢族人群中， rs2227982中CT雜合子和T等位基因、特定單體型CT（PDCD-1.5/1.9）與AS發(fā)病呈正相關(guān)，CC單體型與AS發(fā)病呈負(fù)相關(guān)，PDCD-1基因多態(tài)性與AS之間存在遺傳相關(guān)性。PDCD-1基因多態(tài)性與AS的相關(guān)性還需在更大規(guī)模不同人群中研究，以便得到更多證據(jù)。
　　 第三部分 IL-23R基因多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎關(guān)聯(lián)研究的meta分析
　　 目

14、的：對(duì)國(guó)內(nèi)外有關(guān)IL-23R基因多態(tài)性與AS的研究結(jié)果作meta分析，綜合評(píng)價(jià)IL-23R基因SNP與AS的關(guān)系，為人群AS易感基因的評(píng)估提供依據(jù)。
　　 方法：電子檢索Medline數(shù)據(jù)庫和中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫，根據(jù)一定納入標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)以及數(shù)據(jù)提取，卡方檢驗(yàn)各個(gè)研究之間的異質(zhì)性，采用Review Manager 4.2軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果：共有6篇文獻(xiàn)符合納入標(biāo)準(zhǔn)，被研究的人群涉及9類，基因型頻率分布全部符

15、合Hardy-Weinberg遺傳平衡，Egger檢驗(yàn)均未發(fā)現(xiàn)發(fā)表偏倚。共對(duì)10個(gè)IL-23R SNP位點(diǎn)（rs11209026，rs1004819，rs10489629，rs11465804，rs134315，rs10889677，rs11209032，rs1495965，rs7517847，rs2201841）等位基因的各項(xiàng)研究進(jìn)行meta分析，齊性檢驗(yàn)中除rs10889677外，均未發(fā)現(xiàn)異質(zhì)性（P>0.05），因此rs108896

16、77采用隨機(jī)效應(yīng)模型，其它位點(diǎn)采用固定效應(yīng)模型對(duì)等位基因頻率進(jìn)行分析,綜合結(jié)果表明所有位點(diǎn)等位基因在兩組之間分布均存在差異（P<0.05），5個(gè)位點(diǎn)（rs11209026、rs10489629、rs11465804、rs1343151、rs7517847）等位基因在對(duì)照組分布頻率高于AS組，另5個(gè)位點(diǎn)反之。
　　 結(jié)論：IL-23R SNP與AS呈正相關(guān)或負(fù)相關(guān)，被研究的10個(gè)等位基因中，與AS呈負(fù)相關(guān)性（對(duì)患者起保護(hù)作用）的位