液壓損傷后大鼠損傷鄰近及遠(yuǎn)隔區(qū)域缺血性損害的觀察.pdf

1、目的:
　　 本課題利用大鼠液壓損傷腦外傷模型，觀察大鼠腦損傷后損傷鄰近及遠(yuǎn)隔區(qū)域腦缺血的動(dòng)態(tài)變化，為腦損傷后腦缺血性損害的研究提供基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠36只，體重范圍200～300g在SPF級(jí)動(dòng)物室飼養(yǎng)一周后隨機(jī)分為6組。正常對(duì)照組和假手術(shù)組（僅行顱骨鉆孔，無(wú)外傷打擊）和液壓腦損傷后12h、72h、1w、2w組。每組6只。以改良的大腦中動(dòng)脈定向側(cè)位

2、液壓沖擊法建立大鼠腦外傷模型，取各時(shí)間點(diǎn)大鼠顱腦損傷鄰近及遠(yuǎn)隔區(qū)域腦組織，檢測(cè)乳酸、缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1α)及Bax表達(dá)的變化、采用TUNEL染色法分析神經(jīng)元細(xì)胞凋亡，反映腦缺血及神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的動(dòng)態(tài)變化。
　　 結(jié)果：
　　 1、 損傷臨近區(qū)域，模型組12h組乳酸含量開(kāi)始增多，72h組乳酸含量達(dá)到高峰，1w組乳酸含量下降至2w時(shí)恢復(fù)正常。大鼠腦外傷12h后即有Bax表達(dá)，72h后表達(dá)逐漸增加，1w后表達(dá)達(dá)到高峰，與

3、正常對(duì)照組及假手術(shù)組相比，有明顯的差異(p<0.01)，2w后基本恢復(fù)正常。大鼠腦外傷12h后即有HIF-1α表達(dá)，72h后表達(dá)顯著增加與正常對(duì)照組及假手術(shù)組相比，有明顯的差異(p<0.01)，1w后表達(dá)迅速下降，表達(dá)量低于12h組，2w后基本恢復(fù)正常。大鼠腦外傷12h后即檢測(cè)到神經(jīng)元細(xì)胞凋亡，72h后表達(dá)增加與正常對(duì)照組及假手術(shù)組相比，有明顯的差異，1w后表繼續(xù)增加，2w后達(dá)到高峰。各個(gè)亞組與正常對(duì)照組及假手術(shù)組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p

4、<0.01)。
　　 2、 損傷遠(yuǎn)隔區(qū)域，模型組12h組乳酸含量開(kāi)始增多，72h組乳酸含量達(dá)到高峰，1w組乳酸含量下降至2w時(shí)恢復(fù)正常。大鼠腦外傷12h后即有Bax表達(dá)，72h后表達(dá)逐漸增加，1w后表達(dá)達(dá)到高峰，2w后基本恢復(fù)正常。大鼠腦外傷12h后即有HIF-α表達(dá)，72h后表達(dá)顯著增加與正常對(duì)照組相比，有明顯的差異(p<0.01)，1w后表達(dá)迅速下降，表達(dá)量低于12h組，2w后基本恢復(fù)正常。大鼠腦外傷12h后即檢測(cè)到神經(jīng)元細(xì)

5、胞凋亡，72h后表達(dá)增加與正常對(duì)照組及假手術(shù)組相比，有明顯的差異，1w后表達(dá)繼續(xù)增加，2w后達(dá)到高峰。各個(gè)亞組與正常對(duì)照組及假手術(shù)組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1、 大鼠液壓沖擊腦損傷模型致傷能量測(cè)定方便快捷，具有良好的穩(wěn)定性和可重復(fù)性，能夠較好的再現(xiàn)臨床閉合性顱腦損傷，可以很好的模擬實(shí)際腦外傷，同時(shí)還具有價(jià)格相對(duì)低廉、操作簡(jiǎn)單易學(xué)等特點(diǎn)，方便大批制作模型，可以較好的應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)研究。

6、　　 2、 損傷臨近及遠(yuǎn)隔區(qū)域存在缺血缺氧的變化，其變化規(guī)律與損傷區(qū)域缺血缺氧的變化規(guī)律基本一致。乳酸、HIF是判斷缺血缺氧的敏感性指標(biāo)?？梢愿鶕?jù)兩者含量的變化評(píng)估腦損傷的程度及病情發(fā)展變化。兩者與腦外傷后腦水腫高峰期相吻合，提示乳酸、HIF可能促進(jìn)了腦水腫的發(fā)展。
　　 3、 通過(guò)TUNEL凋亡試劑盒對(duì)各個(gè)時(shí)間點(diǎn)損傷臨近及遠(yuǎn)隔區(qū)域的組織切片進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)有凋亡細(xì)胞的陽(yáng)性表達(dá)，提示Bax蛋白表達(dá)可以調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡，其表達(dá)與細(xì)胞凋亡

7、可能有直接的因果關(guān)系。但是兩者表達(dá)的高峰期不具有一致性。提示Bax與細(xì)胞凋亡可能有直接非同步的因果關(guān)系。
　　 4、 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)TUNEL法，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)顱腦液壓損傷后不同時(shí)間點(diǎn)損傷臨近區(qū)域及遠(yuǎn)隔區(qū)域存在凋亡陽(yáng)性細(xì)胞，提示腦外傷后由于損傷臨近區(qū)域及遠(yuǎn)隔區(qū)域存在細(xì)胞凋亡，可能會(huì)引起損傷區(qū)域和損傷周圍區(qū)域的腦組織發(fā)生萎縮。
　　 5、 實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)，損傷臨近區(qū)域凋亡陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯高于損傷遠(yuǎn)隔區(qū)域，越靠近損傷區(qū)域，細(xì)胞凋亡越明顯，