DHA-1型質(zhì)粒AmpC酶的研究.pdf

1、目的：本課題通過對DHA-1型質(zhì)粒AmpC酶耐藥性分析，流行病學(xué)調(diào)查和臨床病例回顧來較為全面的了解DHA-1型質(zhì)粒AmpC酶的耐藥譜，傳播特征及其菌株感染患者的臨床特征，同時對DHA-1基因表達(dá)的調(diào)控基因ampR和ampD進(jìn)行檢測及克隆測序，并進(jìn)一步研究重組子的表型特征。 方法： 1，收集產(chǎn)DHA-1型質(zhì)粒AmpC酶的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌感染者的臨床資料，比較不同病例組間的年齡，性別，基礎(chǔ)疾病和抗生素前期應(yīng)用情況等風(fēng)

2、險因素。 2，微量稀釋法測定最低抑菌濃度（MIC）；聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）擴增及測序確定DHA-1和超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBL）的基因型。 3，隨機擴增多態(tài)DNA（RAPD）調(diào)查產(chǎn)DHA-1型質(zhì)粒AmpC酶的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的同源性。接合實驗驗證耐藥基因的傳遞性。 4，質(zhì)粒酶切圖譜比對研究攜帶DHA-1基因質(zhì)粒的播散情況。 5，Southern blot進(jìn)行DHA-1基因的定位，同時確定其所在片

3、段大小。 6，對DHA-1型質(zhì)粒AmpC酶的ampR及ampD基因進(jìn)行PCR擴增及測序，比對AmpR蛋白與摩根摩根菌的AmpR蛋白，將ampR基因和ampC基因同時克隆入pUC19載體，測定重組子的MIC。 結(jié)果：臨床資料分組比對后發(fā)現(xiàn)，不同病例組間的年齡，性別和基礎(chǔ)疾病等風(fēng)險因素方面的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。前期應(yīng)用三代頭孢菌素和喹諾酮類在僅產(chǎn)AmpC酶和同時合并產(chǎn)ESBL的組間比較時有顯著性差異。多數(shù)產(chǎn)DHA-1型酶的細(xì)菌

4、呈多重耐藥，并有一株菌對碳青霉烯類藥物耐藥。RAPD和質(zhì)粒酶切圖譜分析表明DHA-1的流行是由克隆傳播和質(zhì)粒播散共同作用造成的。8株DHA-1型質(zhì)粒AmpC酶菌株接合成功。Southern blot實驗證明DHA-1編碼基因位于質(zhì)粒上，雜交片段為6-8KB。肺炎克雷伯菌與大腸埃希菌中擴增測序的AmpR與其起源的摩根摩根菌的AmpR蛋白進(jìn)行比對，發(fā)現(xiàn)在229位（L-Q）和273（A-T）出現(xiàn)氨基酸序列的改變。 結(jié)論：產(chǎn)DHA-1型