質(zhì)粒dna的酶切和連接

1、華南師范大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告學(xué)生姓名閆紅博學(xué)號(hào)20122501108專業(yè)生物科學(xué)年級(jí)、班級(jí)12級(jí)生科三班課程名稱分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目：質(zhì)粒DNA酶切、連接、電泳檢測(cè)實(shí)驗(yàn)類型□驗(yàn)證□設(shè)計(jì)□綜合實(shí)驗(yàn)時(shí)間2015年4月21日實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)老師實(shí)驗(yàn)評(píng)分一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握限制性內(nèi)切酶的特性及酶切體系的建立；2、了解影響酶切的因素；3、掌握DNA連接酶的性質(zhì)以及連接體系的建立；4、了解影響連接反應(yīng)的因素。二、實(shí)驗(yàn)原理1、限制性內(nèi)切酶（restrictione

2、ndonuclease）:一種在特殊核甘酸序列處水解雙鏈DNA的內(nèi)切酶。2、限制性內(nèi)切酶能特異性地結(jié)合于一段被稱為限制性酶識(shí)別序列的DNA序列之內(nèi)或其附近的特異性位點(diǎn)上，并切割雙鏈DNA。生物體內(nèi)能識(shí)別并切割特異的雙鏈DNA序列的一種內(nèi)切核酸酶。它是可以將外來(lái)的DNA切斷的酶，即能夠限制異源DNA的侵入并使之失去活力，但對(duì)自己的DNA卻無(wú)損害作用，這樣可以保護(hù)細(xì)胞原有的遺傳信息。由于這種切割作用是在DNA分子內(nèi)部進(jìn)行的，故名限制性內(nèi)切酶

3、。3、DNA連接酶是1967年在三個(gè)實(shí)驗(yàn)室同時(shí)發(fā)現(xiàn)的。它是一種封閉DNA鏈上缺口酶，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA鏈的5PO4與另一DNA鏈的3OH生成磷酸二酯鍵。但這兩條鏈必須是與同一條互補(bǔ)鏈配對(duì)結(jié)合的(T4DNA連接酶除外)，而且必須是兩條緊鄰DNA鏈才能被DNA連接酶催化成磷酸二酯鍵。4、常用的DNA連接酶有兩種：來(lái)自大腸桿菌的DNA連接酶和來(lái)自噬菌體的T4DNA連接酶。二者的作用機(jī)理類似。三、實(shí)驗(yàn)試劑和材料1、材料與

4、試劑酶切反應(yīng)：標(biāo)準(zhǔn)pUC19(2686bp)↓置于已調(diào)好溫度為12℃14℃PCR儀中↓保溫12h后取出↓電泳檢測(cè)樣品代樣品代號(hào)成分成分用量（μ用量（μl）ddH2OddH2O7.07.0IλDNAEcoT14DNAEcoT14I片段片段10.010.0f連接緩沖液連接緩沖液2.02.0TT4DNAT4DNA連接酶連接酶1.01.0總體積總體積20五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果質(zhì)粒DNA酶切實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖結(jié)果分析：從左向右，我的是第六條帶，沒(méi)有出現(xiàn)擴(kuò)散情況。說(shuō)