質粒dna的酶切和連接

1、華南師范大學實驗報告學生姓名閆紅博學號20122501108專業(yè)生物科學年級、班級12級生科三班課程名稱分子生物學實驗實驗項目：質粒DNA酶切、連接、電泳檢測實驗類型□驗證□設計□綜合實驗時間2015年4月21日實驗指導老師實驗評分一、實驗目的1、掌握限制性內切酶的特性及酶切體系的建立；2、了解影響酶切的因素；3、掌握DNA連接酶的性質以及連接體系的建立；4、了解影響連接反應的因素。二、實驗原理1、限制性內切酶（restrictione

2、ndonuclease）:一種在特殊核甘酸序列處水解雙鏈DNA的內切酶。2、限制性內切酶能特異性地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內或其附近的特異性位點上，并切割雙鏈DNA。生物體內能識別并切割特異的雙鏈DNA序列的一種內切核酸酶。它是可以將外來的DNA切斷的酶，即能夠限制異源DNA的侵入并使之失去活力，但對自己的DNA卻無損害作用，這樣可以保護細胞原有的遺傳信息。由于這種切割作用是在DNA分子內部進行的，故名限制性內切酶

3、。3、DNA連接酶是1967年在三個實驗室同時發(fā)現(xiàn)的。它是一種封閉DNA鏈上缺口酶，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA鏈的5PO4與另一DNA鏈的3OH生成磷酸二酯鍵。但這兩條鏈必須是與同一條互補鏈配對結合的(T4DNA連接酶除外)，而且必須是兩條緊鄰DNA鏈才能被DNA連接酶催化成磷酸二酯鍵。4、常用的DNA連接酶有兩種：來自大腸桿菌的DNA連接酶和來自噬菌體的T4DNA連接酶。二者的作用機理類似。三、實驗試劑和材料1、材料與

4、試劑酶切反應：標準pUC19(2686bp)↓置于已調好溫度為12℃14℃PCR儀中↓保溫12h后取出↓電泳檢測樣品代樣品代號成分成分用量（μ用量（μl）ddH2OddH2O7.07.0IλDNAEcoT14DNAEcoT14I片段片段10.010.0f連接緩沖液連接緩沖液2.02.0TT4DNAT4DNA連接酶連接酶1.01.0總體積總體積20五、實驗結果質粒DNA酶切實驗結果圖結果分析：從左向右，我的是第六條帶，沒有出現(xiàn)擴散情況。說