降鈣素基因相關肽對ALI時小鼠巨噬細胞替代激活的影響.pdf

1、巨噬細胞為免疫系統(tǒng)的主要效應細胞，其在機體中執(zhí)行的功能由其特定的激活方式決定。巨噬細胞的激活大致分為兩種:經典激活和替代激活。其中替代激活在炎癥反應后期較為常見，發(fā)生替代激活的巨噬細胞通過分泌多種抗炎和促修復介質參與炎癥消退與組織修復。體外IL-4可誘導巨噬細胞替代激活，精氨酸酶-1（Arg-1）和IL-10是巨噬細胞替代激活的標志性蛋白。在多種肺部疾病的發(fā)生、發(fā)展中均存在不同表型巨噬細胞激活的失衡。急性肺損傷(ALI)時，巨噬細胞替代

2、激活可有效調控炎癥反應，加速ALI的損傷修復。因此，尋找促進巨噬細胞替代激活的內外源性物質，對ALI時的瀑布式炎癥反應進行及時、有效的干預，對防治ALI的炎癥遷延、促進損傷修復意義重要。
　　降鈣素基因相關肽（CGRP）是肺內含量最為豐富的神經肽。研究表明CGRP主要通過調控炎癥介導的巨噬細胞趨化因子和細胞因子的產生，進而發(fā)揮對巨噬細胞的免疫功能的調節(jié)作用，但其對巨噬細胞替代激活的影響尚未見相關報道。本課題將從整體和細胞水平分別觀

3、察小鼠ALI動物模型和LPS應激的小鼠巨噬細胞CGRP的表達變化，并研究CGRP對IL-4誘導的小鼠巨噬細胞替代激活的影響及其可能機制。
　　目的:觀察ALI時小鼠肺組織內CGRP mRNA表達的變化，探討CGRP對IL-4誘導的小鼠巨噬細胞替代激活的影響及其可能機制。
　　方法:
　　1.動物模型復制:腹腔注射LPS復制小鼠ALI動物模型，采用RT-PCR法分別檢測不同時間點小鼠肺內CGRP mRNA的相對表達量。<

4、br>　　2.細胞模型復制和時效量效檢測:IL-4處理小鼠巨噬細胞(RAW264.7，ATCC: TIB-7TM)復制小鼠巨噬細胞替代激活模型，觀察CGRP對小鼠巨噬細胞替代激活的影響。采用RT-PCR法檢測各組Arg-1及IL-10 mRNA的相對表達。Arg-1相對表達的時效檢測:時間點選取IL-4處理后的0h、8h、16h和24 h，CGRP濃度為10-7M，預處理時間為1 h;Arg-1相對表達的量效檢測:IL-4處理時間為24

5、 h，CGRP濃度為10-8、5×10-8、10-7和5×10-7 M，預處理時間為1h。
　　3.信號轉導機制:采用鈣調蛋白信號通路阻斷劑(W7)、PKC信號通路阻斷劑(H7)、和PKA信號通路阻斷劑(H89)預處理，觀察CGRP促進IL-4誘導小鼠巨噬細胞Arg-1 mRNA表達的胞內信號轉導機制。
　　結果:
　　1.ALI小鼠肺內CGRP mRNA的表達RT-PCR檢測ALI小鼠0h、8h、16h、24 h肺內

6、CGRP mRNA水平的相對表達。結果顯示:與對照組相比，ALI小鼠肺內CGRP的表達明顯增高;8h即達峰值，16h和24 h較8h時表達略微降低。
　　2.LPS應激下小鼠巨噬細胞內CGRP mRNA的表達LPS處理小鼠巨噬細胞，8h后RT-PCR檢測其CGRP mRNA的表達，與對照組相比，LPS處理明顯增加CGRP mRNA的表達量。
　　3.CGRP對IL-4誘導小鼠巨噬細胞替代激活標志分子Arg-1和IL-10mR

7、NA表達的影響
　　(1) Arg-1: RT-PCR結果顯示，CGRP預處理對靜息狀態(tài)小鼠巨噬細胞Arg-1 mRNA的表達無影響，但可呈時間依賴性(0、8、16、24h)和濃度依賴性(10-8、5×10-8、10-7、5×10-7 M)促進IL-4誘導的小鼠巨噬細胞替代激活時Arg-1 mRNA的表達。
　　(2) IL-10: RT-PCR結果顯示，靜息狀態(tài)小鼠巨噬細胞IL-10mRNA表達水平較低，CGRP預處理可促

8、進IL-4誘導的小鼠巨噬細胞IL-10 mRNA的表達。
　　4.CGRP促進IL-4誘導小鼠巨噬細胞Arg-1 mRNA表達的胞內信號轉導機制RT-PCR檢測結果顯示:與對照組相比，IL-4可促進小鼠巨噬細胞Arg-1 mRNA的表達，CGRP可進一步增加其表達;而鈣調蛋白信號通路阻斷劑(W7)、PKC信號通路阻斷劑(H7)和PKA信號通路阻斷劑(H89)預處理均可抑制CGRP對IL-4的促進效應。
　　結論: