小麥赤霉菌拮抗細(xì)菌的鑒定、發(fā)酵條件及抗菌物質(zhì)的初步研究.pdf

1、植物真菌病害是植物病害中最嚴(yán)重的一種病害，是造成農(nóng)業(yè)損失的主要原因之一。真菌分布極廣，目前已知的有4萬多種，在每種作物上都可發(fā)現(xiàn)病種。小麥赤霉病又叫紅頭麥，是由禾谷鐮孢屬真菌引起的。小麥赤霉病是產(chǎn)麥區(qū)小麥生產(chǎn)上的一大病害，對小麥產(chǎn)量影響很大，重病田產(chǎn)量損失可達(dá)50％以上。長期以來，國內(nèi)外對小麥赤霉病的防治多從農(nóng)業(yè)防治和化學(xué)防治出發(fā)，防治效果不明顯，而且造成了一定程度的環(huán)境污染。應(yīng)用拮抗微生物對植物真菌病害進(jìn)行生物防治是比較理想的方法。因

2、此，本研究對一株小麥赤霉菌拮抗細(xì)菌進(jìn)行了初步研究。 采用傳統(tǒng)的表型分類、化學(xué)分類等一般細(xì)菌常用鑒定方法，對中科院成都生物所農(nóng)抗組實(shí)驗(yàn)室保存的一株小麥赤霉菌拮抗菌株進(jìn)行形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化特征等水平的鑒定，該細(xì)菌的細(xì)胞呈桿狀，細(xì)胞直徑小于1微米，革蘭氏染色陽性，能形成芽孢，屬于芽孢桿菌屬(Bacillus)。該細(xì)菌產(chǎn)生的芽孢不使孢囊膨大，不形成伴孢晶體，美藍(lán)染色均一，可在pH5.7的培養(yǎng)基中生長，可在7％氯化鈉中生長，且該

3、細(xì)菌為好氧菌，在厭氧條件下不生長，能水解淀粉和還原硝酸鹽。初步鑒定該拮抗菌為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)。 在拈抗物質(zhì)抗菌活性測定的研究中，分別采用對峙培養(yǎng)法、異步培養(yǎng)法和杯碟測定法研究枯草芽孢桿菌對小麥赤霉菌的抑制作用，探索抗菌活性測定的條件。用建立起來的試驗(yàn)方法測定抑菌活性，結(jié)果表明枯草芽孢桿菌對小麥赤霉菌確實(shí)具有較強(qiáng)的抑制作用。 在枯草芽孢桿菌液體發(fā)酵條件的優(yōu)化研究中，通過正交試驗(yàn)和單因素試驗(yàn)

4、，對該菌的培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化。在優(yōu)化培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，系統(tǒng)研究了起始pH值、培養(yǎng)溫度和時(shí)間、接種量、培養(yǎng)基裝量等因素對枯草芽孢桿菌發(fā)酵產(chǎn)物抑菌活性的影響，確定最佳培養(yǎng)基配方為：淀粉0.75％，玉米粉1.0％，NaCl 0.90％，豆餅粉2.5％，蛋白胨0.1％；最適發(fā)酵條件為：溫度28℃，pH值7.0-7.5，裝量為三角瓶體積的8％-12％，接種量10％，搖床轉(zhuǎn)速200r/min。選用(NH<,4>)<,2>SO<,4>分級鹽析和

5、乙醇沉淀兩種方法探討了拮抗物質(zhì)的粗分離條件并對拮抗物質(zhì)粗提液的部分特性進(jìn)行了初步研究，結(jié)果表明，該拮抗物質(zhì)適合用(NH<,4>)<,2>SO<,4>分級鹽析的方法進(jìn)行初步提取，在(NH<,4>)<,2>SO<,4>飽和度30％-70％的范圍內(nèi)，滑l生物質(zhì)基本沉淀完全，由此可以初步推斷該拮抗物質(zhì)可能是一種蛋白類或肽類物質(zhì)；該拮抗物質(zhì)不適合用乙醇沉淀提取，推測其原因可能是發(fā)酵上清液中的離子強(qiáng)度太大。拮抗物質(zhì)粗提液的穩(wěn)定性試驗(yàn)表明，該拮抗物質(zhì)