小麥赤霉菌FgAC1基因敲除及功能研究.pdf

1、小麥赤霉病是一世界性真菌病害，該病由多種鐮刀菌引起，禾谷鐮刀菌(Fusarium graminearum)是引發(fā)該病的優(yōu)勢(shì)種之一。由于該病原菌侵染使得小麥嚴(yán)重減產(chǎn)，除侵染小麥外，它還侵染大麥、玉米、高粱等其他禾谷類作物，給人類帶來了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。不僅如此，小麥赤霉菌產(chǎn)生的真菌毒素還嚴(yán)重危害人、畜的健康。近年來全球?qū)坦如牭毒_展了大量的研究工作，并取得了一系列重大進(jìn)展。目前，對(duì)禾谷鐮刀菌的研究逐步從傳統(tǒng)的植物病理學(xué)水平上升到功能基因組

2、學(xué)水平上來，其研究熱點(diǎn)逐漸集中在探索其致病機(jī)理和發(fā)現(xiàn)新的藥物作用靶點(diǎn)。
　　 本研究中，作者采用基因敲除技術(shù)運(yùn)用同源重組原理，敲除小麥赤霉菌(Fusarium graminearum)致病相關(guān)基因FgACl，并對(duì)其功能進(jìn)行了分析。首先采用Split Marker法構(gòu)建基因敲除盒，對(duì)野生型菌株P(guān)H-1原生質(zhì)體進(jìn)行轉(zhuǎn)化，獲得大量轉(zhuǎn)化子，經(jīng)潮霉素初篩后再對(duì)轉(zhuǎn)化子進(jìn)行單孢分離，將分離得到的單孢子再進(jìn)行PCR檢測(cè)，然后再進(jìn)行Southem

3、雜交驗(yàn)證，最終獲得兩個(gè)缺失突變株。
　　 以該基因缺失株為研究對(duì)象，禾谷鐮刀菌野生型PH-1菌株為對(duì)照，通過菌落形態(tài)觀察、生長速度測(cè)定、孢子形態(tài)觀察、產(chǎn)孢量、自交、玉米絲侵染、西紅柿侵染等實(shí)驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行表型觀察和致病力檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)gAC1缺失突變體菌落顏色呈較深的粉紅色，比野生型顏色明顯加深，生長速度明顯減慢，不影響分生孢子和子囊孢子的產(chǎn)生，但是分生孢子明顯增長，分生孢子的橫隔膜數(shù)沒有明顯增多，而是相鄰兩橫隔之間的距離加長，