小麥赤霉菌FgCPKA基因敲除及功能研究.pdf

1、小麥赤霉菌是一種引起世界范圍內(nèi)小麥赤霉病的病原真菌，小麥赤霉病(Fusarium head blight or scab)是世界溫暖潮濕和半潮濕地區(qū)廣泛發(fā)生的一種的毀滅性病害，近幾年在歐洲、亞洲和北美洲多有爆發(fā)流行。在我國也是主要小麥病害，使小麥產(chǎn)量嚴重下降。小麥赤霉菌能夠侵染麥類作物和玉米使其致病，也能侵染其他的植物，如：水稻、高梁等作物及冰草、稗草和狗尾草等雜草。小麥赤霉菌產(chǎn)生的真菌毒素脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、玉蜀黍赤霉烯酮等被人、畜誤

2、食后可致發(fā)熱、嘔吐、腹瀉等癥狀，懷孕母畜誤食后可引起流產(chǎn)。目前，小麥赤霉菌的防治主要還是化學殺菌劑。然而，從環(huán)境保護角度考慮，通過分子生物學研究，揭示小麥赤霉菌致病機理進而指導培育抗病品種，對于防治小麥赤霉病的發(fā)生具有重要的意義。
　　 本研究利用同源重組原理，采用Split marker技術，構建了小麥赤霉菌FgCPKA基因敲除盒。應用PEG介導的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化，在含有潮霉素的培養(yǎng)基上進行選擇獲得轉(zhuǎn)化子。為了獲得陽性克隆，對單胞

3、分離的轉(zhuǎn)化子再次進行了PCR正負篩選及Southern雜交驗證，進一步對陽性轉(zhuǎn)化子進行表型觀察及功能研究。
　　 △fgcpka菌株形態(tài)與野生型菌株有明顯差別，敲除突變體△fgcpka菌絲短小、致密，生長速率遠遠小于野生型PH-1菌株。在CMC液體培養(yǎng)基中，fgcpka產(chǎn)生的分生孢子數(shù)量明顯少于野生型PH-1菌株。自交測驗表明，敲除突變體△fgcpka在胡蘿卜培養(yǎng)基上也可產(chǎn)生少量的子囊殼。致病力檢測試驗中，玉米須被野生型PH-1