UT-B基因敲除小鼠免疫功能的研究.pdf

1、本研究以尿素通道蛋白B(Urea Transporter B，UT-B)基因敲除小鼠(UT-B-/-)和UT-B野生型小鼠(WT)為實(shí)驗(yàn)對象，探討UT-B基因?qū)π∈竺庖吖δ艿挠绊?。采用基因鑒定法篩選UT-B基因敲除小鼠和UT-B野生型小鼠70只，分兩組進(jìn)行試驗(yàn)。第一組各取UT-B基因敲除小鼠和UT-B野生型小鼠15只，分別用于檢測脾臟UT-B蛋白的表達(dá)、免疫器官指數(shù)的測定、小鼠脾臟淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)以及流式分析脾臟和外周血中淋巴細(xì)胞分群情

2、況。第二組取UT-B基因敲除小鼠和UT-B野生型小鼠各20只進(jìn)行荷瘤試驗(yàn)和腫瘤組織形態(tài)學(xué)觀察。
　　 蛋白免疫印跡(Western-blot)試驗(yàn)結(jié)果表明，UT-B基因敲除小鼠脾臟不表達(dá)UT-B蛋白，UT-B野生型小鼠脾臟表達(dá)分子量為41-54KD的UT-B蛋白。脾臟指數(shù)檢測得出UT-B基因敲除小鼠脾臟指數(shù)為2.76，UT-B野生型小鼠脾臟指數(shù)為3.71，UT-B基因敲除小鼠脾臟指數(shù)顯著低于UT-B野生型小鼠(P＜0.01)。脾

3、臟淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中刀豆蛋白A(ConA)刺激的UT-B基因敲除小鼠和UT-B野生型小鼠的脾臟淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率分別為2.7和1.8(P＜0.01);脂多糖(LPS)刺激的UT-B基因敲除小鼠和UT-B野生型小鼠的脾臟淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率分別為3.62和3.22(P＜0.01);UT-B基因敲除小鼠脾臟淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率顯著高于UT-B野生型小鼠(P＜0.01)。流式檢測結(jié)果表明，UT-B基因敲除小鼠的CD4+T細(xì)胞，CD8+T細(xì)胞數(shù)量分別比野生型小

4、鼠多15.18％(P＜0.01)和3.16％(P＞0.05)，UT-B基因敲除小鼠B細(xì)胞數(shù)量低于WT小鼠（P＞0.05）。負(fù)荷前列腺腫瘤試驗(yàn)的抑瘤率為55.1％，UT-B基因敲除小鼠和UT-B野生型小鼠荷瘤后脾臟指數(shù)分別為4.7和4.3，兩者相比差異不顯著(P＞0.05);UT-B基因敲除小鼠荷瘤后脾臟和外周血中CD4+T和T細(xì)胞數(shù)量分別比UT-B野生型小鼠高30.71％(P＜0.01)和37.45％(P＜0.01)。腫瘤組織石蠟切片H

5、E染色形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果顯示UT-B野生型荷瘤小鼠腫瘤組織石蠟切片中腫瘤細(xì)胞排列緊密，壞死較少、異型性明顯、壞死區(qū)少量淋巴細(xì)胞浸潤;UT-B基因敲除荷瘤小鼠腫瘤組織石蠟切片中腫瘤細(xì)胞排列紊亂，壞死較多，異型性不明顯，癌細(xì)胞核固縮，壞死區(qū)有大量淋巴細(xì)胞浸潤。
　　 以上結(jié)果可以得出如下推斷:UT-B基因的敲除增加了小鼠脾臟和外周血中發(fā)揮免疫功能的CD4+T細(xì)胞和T細(xì)胞的數(shù)量，增強(qiáng)了小鼠的細(xì)胞免疫功能，起到抑制腫瘤的作用;UT-B基因與