Tollip基因敲除對壓力負(fù)荷誘導(dǎo)的小鼠心肌肥厚及心功能影響的研究.pdf

1、目的:
　　通過主動脈縮窄術(shù)建立壓力負(fù)荷誘導(dǎo)的小鼠心肌肥厚模型,以WT小鼠和Tollip基因敲除小鼠為研究對象,探討Tollip在心肌肥厚中的作用。
　　方法:
　　選取8-10W,23.5-27.5g的雄性野生型小鼠(WildType,C57BL/6背景)、Tollip基因敲除小鼠(TollipKnockOut,C57BL/6背景)為實(shí)驗(yàn)對象,隨機(jī)分為兩組并施以主動脈縮窄術(shù)(aorticbinding,AB)和假手術(shù)

2、(SHAM)。術(shù)后4周首先運(yùn)用超聲心動圖和血流動力學(xué)評價心臟結(jié)構(gòu)和心功能。取材稱量體重(BodyWeight)、心臟重量(HeartWeight)、肺臟重量(LungWeight)、量取脛骨長度(TibaLength)并計算心臟重量與體重的比值(HW/BW)、心臟重量與脛骨長度比值(HW/TL)和肺臟重量與體重的比值(LW/BW)。病理學(xué)檢測觀察心肌細(xì)胞橫截面積及心臟間質(zhì)和周圍血管膠原纖維。Real-timePCR檢測心肌肥厚標(biāo)志物(A

3、NP、BNP、β-MHC)及心肌纖維化標(biāo)志物(CollagenIα、CollagenⅢ、CTGF)mRNA水平。Westernblot方法檢測心肌肥厚信號通路分子的蛋白水平,免疫共沉淀檢測蛋白與蛋白的相互作用。
　　結(jié)果:
　　壓力負(fù)荷誘導(dǎo)的心肌肥厚模型中,與WT小鼠相比,TollipKO表現(xiàn)為:1、心肌肥厚程度增加:心臟重量增加,HW/BW、HW/TL和LW/BW比值增加;心肌細(xì)胞橫截面積,心肌細(xì)胞體積增大,伴心肌肥厚標(biāo)志

4、物轉(zhuǎn)錄水平升高;2、心功能惡化:心室壁厚度增加,射血分?jǐn)?shù)、短軸縮短率、dp/dtmax、dp/dtmin降低;3、心肌纖維化程度增加:心肌間質(zhì)和周圍血管間質(zhì)的膠原纖維增多,纖維化標(biāo)志物的mRNA水平升高;4、相關(guān)信號通路的改變:心臟組織中AKT及其下游分子GSK3β磷酸化水平上調(diào),同時在HEK293T工具細(xì)胞中,Tollip能與AKT相互作用。
　　結(jié)論:
　　Tollip能通過與AKT相互作用抑制AKT-GSK3β信號通路