毛殼菌株的篩選鑒定以及抗菌物質(zhì)發(fā)酵條件優(yōu)化.pdf

1、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中每年因?yàn)檗r(nóng)作物病蟲害造成很多植物死亡或者減產(chǎn)，給糧食生產(chǎn)帶來(lái)十分巨大的損失。生物防治植物病蟲害中具有持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)、防治效果顯著、安全性好并且不使生物產(chǎn)生抗藥性。因此，生物防治被認(rèn)為是未來(lái)農(nóng)業(yè)病蟲害防治中主要的防治方法。毛殼菌是一種主要的生物防治菌，它具有作為很好的生物防治菌劑的能力。不僅可以通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)作用，重寄生作用，誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗性還可以產(chǎn)生抗菌物質(zhì)抑制植物病原菌。
　　本課題主要研究從特定環(huán)境土壤中篩選具有生物防治功能的

2、毛殼菌，并初步研究其代謝物發(fā)酵條件。本實(shí)驗(yàn)，采用分離培養(yǎng)基從樣品中篩選具有纖維素降解能力的微生物，通過(guò)在顯微鏡下觀察微生物形態(tài)結(jié)構(gòu)，篩選發(fā)現(xiàn)其中有8株是毛殼菌菌株分別為G12、G14、G15、H6、H10、I3、I4、I5。分子水平鑒定主要是通過(guò) ITS序列分析，鑒定微生物種屬關(guān)系，發(fā)現(xiàn)八株菌株與球毛殼菌相似度高達(dá)94％以上。通過(guò)與病原菌對(duì)峙實(shí)驗(yàn)作為復(fù)篩，發(fā)現(xiàn)菌株H10對(duì)核盤菌、立枯絲核菌、尖孢鐮刀菌均有較好的生物防治能力。而且其生長(zhǎng)速

3、度也相對(duì)較快，在28℃條件下，4d就能長(zhǎng)滿9cm的平板，在3d時(shí)候就開始有暗色的子囊殼產(chǎn)生。
　　通過(guò)產(chǎn)酶培養(yǎng)基誘導(dǎo)，每天測(cè)毛殼菌H10菌株纖維素類酶活，發(fā)現(xiàn)28℃、170rpm條件下，培養(yǎng)2d酶活達(dá)到最大，其中濾紙酶活、外切葡聚糖酶活、內(nèi)切葡聚糖酶活、β-葡萄糖苷酶活分別為0.55U、0.35U、0.47U、0.47U。接著通過(guò)在28℃、170rpm條件下，PDB液體發(fā)酵培養(yǎng)。經(jīng)過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，液體培養(yǎng)過(guò)程中菌體幾乎不產(chǎn)生生殖結(jié)構(gòu)，

4、沒(méi)有子囊殼、以及子囊孢子等結(jié)構(gòu)的存在。推測(cè)可能是由于氧氣量以及附著物的原因，造成菌絲無(wú)法產(chǎn)生生殖結(jié)構(gòu)。進(jìn)一步研究在不同的pH、溫度條件下對(duì)代謝物抑菌能力的影響。將發(fā)酵液在0.1MPa，40℃下進(jìn)行濃縮。研究發(fā)現(xiàn)，在初始pH為6.5時(shí)，抑菌率達(dá)到最大至47.32%。在發(fā)酵時(shí)間為13d，代謝物的抑菌能力最大至43.11%。研究還發(fā)現(xiàn)菌體量的大小對(duì)代謝物的產(chǎn)量也有影響。
　　盡管本課題主要是基礎(chǔ)研究，但是它擴(kuò)大了生物防治的菌種資源，并且