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文檔簡(jiǎn)介
1、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)J-4菌株是從健康肉雞糞便中分離得到的益生菌株,具有防治畜禽腹瀉、促進(jìn)畜禽生長(zhǎng)的作用。J-4菌株能產(chǎn)生抑制大腸桿菌等腹瀉病原菌的胞外抑菌物質(zhì),該抑菌物質(zhì)具有開發(fā)成為飼料添加劑的潛力。本研究?jī)?yōu)化了J-4菌株產(chǎn)生抑菌物質(zhì)的發(fā)酵條件,對(duì)抑菌物質(zhì)進(jìn)行初步分離,獲得其粗提物,并對(duì)粗提物抑菌活性的穩(wěn)定性進(jìn)行了初步研究。
通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)對(duì)J-4菌株產(chǎn)抑菌物質(zhì)條件進(jìn)行優(yōu)化,最終確定最
2、佳培養(yǎng)條件為發(fā)酵溫度37℃、裝液量100mL(250mL)、接種量5%及發(fā)酵周期36h;最佳發(fā)酵培養(yǎng)基組成為葡萄糖1.00%、黃豆餅粉1.00%、MgSO40.15%和Na2HPO4-NaH2PO40.10%。優(yōu)化后,J-4菌株產(chǎn)生的抑菌物質(zhì)對(duì)應(yīng)的抑菌面積比基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基對(duì)應(yīng)的抑菌圈面積增大50.25%。
通過比較乙醇、丙酮沉淀,乙酸乙酯、乙醚和三氯甲烷萃取,硫酸銨鹽析等方法對(duì)J-4菌株發(fā)酵上清液抑菌物質(zhì)的提取效果,確定硫酸銨
3、鹽析法是初步分離該抑菌物質(zhì)的最佳方法。鹽析的最佳硫酸銨濃度為60%飽和度,并通過截留分子量為8-10KD的透析膜透析,薄膜濃縮和冷凍干燥制備了該抑菌物質(zhì)的粗提物。
以含粗提物1.0mg/mL的溶液為對(duì)象,研究了溫度、pH、蛋白酶、有機(jī)溶劑、陰陽離子及表面活性劑等對(duì)抑菌物質(zhì)活性的影響。在60℃或100℃條件下保溫20min,粗提物水溶液的抑菌活性基本不變,在121℃下保溫5min只能保持約50%的抑菌活性;在pH2.0~pH7.
4、0范圍內(nèi)隨著pH的升高,粗提物表現(xiàn)出的抑菌活性越強(qiáng),超過pH7.0抑菌活性也隨之降低;粗提物溶液被100mg/mL的胃蛋白酶處理30min后,仍保持85%以上的抑菌活性,且對(duì)胰蛋白酶穩(wěn)定;SDS能明顯降低粗提物的抑菌活性,達(dá)到35mg/mL以上時(shí),抑菌活性完全喪失;隨EDTA濃度的增大,抑菌物質(zhì)的活性逐漸降低;吐溫80和β-巰基乙醇對(duì)粗提物抑菌活性沒有影響。乙醇、丙酮、乙腈、乙酸乙酯、乙醚、三氯甲烷和苯等7種有機(jī)溶劑對(duì)粗提物的抑菌活性基
5、本沒有影響。陽離子Ca2+和K+對(duì)粗提物的抑菌活性有促進(jìn)作用,Na+和Mg2+對(duì)抑菌物質(zhì)的抑菌活性基本無影響,Mn2+對(duì)抑菌物質(zhì)的抑菌活性有一定的抑制作用;陰離子Cl-對(duì)粗提物的抑菌活性基本沒有影響,SO42-、NO3-、HCO3-和H2PO4-對(duì)抑菌活性均有一定的抑制作用。
總之,在優(yōu)化發(fā)酵條件,提高了抑菌物質(zhì)發(fā)酵活性的基礎(chǔ)上,確定了獲得粗提物的方法,并對(duì)粗提物活性的影響因素進(jìn)行了研究。為該抑菌物質(zhì)的進(jìn)一步深入研究及利用該抑
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