Pannexin1在腎性高血壓大鼠左心室纖維化中的作用與機(jī)制.pdf

1、目的:通過觀察縫隙連接蛋白家族的新成員Pannexin1(Panx1)在腎性高血壓大鼠心肌纖維化發(fā)生發(fā)展中的表達(dá)變化，探討其在心肌纖維化過程中的作用及與心肌ATP途徑的相關(guān)性。
　　 方法:
　　 ①兩腎一夾(2K1C)腎性高血壓大鼠模型的建立:清潔級(jí)雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠24只，體重200-250g，隨機(jī)分為對(duì)照組和模型組。模型組行兩腎一夾手術(shù)，對(duì)照組行假手術(shù)。飼養(yǎng)8周后，用戊巴比妥鈉（35mg/

2、kg體重）腹腔麻醉，采用左心導(dǎo)管法測(cè)量平均頸動(dòng)脈壓(mean carotid arterial pressure，mCAP)、左室舒張末期壓（left ventricular end diastolic pressure，LVEDP）、左心室壓力變化最大速率(maximum left ventricular developed pressure rate，LV±dp/dtmax)，并測(cè)定左心重（左心室+室間隔）與體重比值(LVM/BW)

3、。
　　 ②HE染色觀察心肌形態(tài)學(xué)改變。
　　 ③Masson三色染色法觀察心肌膠原含量。
　　 ④羥脯氨酸定量測(cè)定心肌膠原含量。
　　 ⑤免疫印跡westem-blot方法測(cè)定左心室中Panx1蛋白的含量。
　　 ⑥實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定左心室中Panx1，ATP受體(P2X7R，P2Y6R)的mRNA基因表達(dá)水平。
　　 ⑦生物素-生物素酶法測(cè)定左心室中ATP的含量。
　　 結(jié)

4、果:
　　 ①與對(duì)照組相比:模型組mCAP高61.26％(P＜0.05)，LVM/BW高30％(P＜0.05)LVEDP高30.11％(P＜0.05),LV+dp/dtmax低42.22％(P＜0.05),LV-dp/dtmax低41.89％(P＜0.05)。
　　 ②HE染色結(jié)果:光鏡下可見模型組心肌細(xì)胞排列紊亂，心肌纖維相交聯(lián)。
　　 ③Massom三色染色結(jié)果:光鏡下可見模型組心肌細(xì)胞間質(zhì)膠原纖維明顯增多。

5、
　　 ④羥脯氨酸定量結(jié)果:與對(duì)照組相比，模型組左心室膠原含量高40.83％(P＜0.05)。
　　 ⑤western-blot結(jié)果:與對(duì)照組相比，模型組左心室Panx1蛋白含量高240.6％(P＜0.05)。
　　 ⑥實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果:與對(duì)照組相比，模型組左心室Panx1基因表達(dá)水平高3.8倍，P2X7R基因表達(dá)水平高2.84倍，P2Y6R基因表達(dá)水平高5.45倍（均P＜0.05）。
　　 ⑦生物