脂氧素A-,4-抑制H22荷瘤小鼠腫瘤生長及其血管生成作用的研究.pdf

1、研究背景：在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中，腫瘤血管發(fā)生（tumor angiogenesis）、血管網(wǎng)向腫瘤組織內(nèi)滲透發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。如何調(diào)控腫瘤“血管生成開關(guān)”一直是癌癥防治領(lǐng)域研究的熱點，針對腫瘤血管生成這一關(guān)鍵環(huán)節(jié)研發(fā)藥物，為癌癥的治療提供了新的行之有效的手段。Rudolf Virchow于1860年首次發(fā)現(xiàn)了癌癥和炎癥的相關(guān)性。目前，炎癥反應(yīng)已被證實是腫瘤局部微環(huán)境中一個主要特征。脂氧素 (lipoxins，LXs)是第一

2、個在活體內(nèi)被鑒定的內(nèi)源性炎癥反應(yīng)“剎車信號（braking signal）”家族，被發(fā)現(xiàn)在弓形蟲感染宿主血清中高表達。此外，弓形蟲急性感染的小鼠腫瘤模型中，腫瘤血管生成顯著減少，腫瘤生長也得到了明顯的抑制。這強烈提示，脂氧素很可能介入到腫瘤的發(fā)生過程中。
　　 目的：研究LXA4對H22荷瘤小鼠腫瘤生長及轉(zhuǎn)移的抑制作用，并初步探討其可能的作用機制。
　　 方法：體外培養(yǎng)小鼠H22肝癌細胞，實驗分為四組，分別給予不同濃度L

3、XA4處理，采用免疫酶方法測定常氧下H22細胞培養(yǎng)上清內(nèi)VEGF表達；用氯化鈷（CoCl2）（200μM）誘導(dǎo)常氧下缺氧誘導(dǎo)因子（HIF）-1α的表達，實驗分為空白組、CoCl2組和CoCl2+LXA4組，采用熒光免疫細胞化學(xué)方法觀察細胞內(nèi)HIF-1α的表達水平及核轉(zhuǎn)位情況；免疫印跡法用來檢測細胞內(nèi)HIF-1α蛋白含量。整體實驗中，采用活體腹水H22肝癌細胞皮下接種法復(fù)制成小鼠H22荷瘤模型，實驗分為空白組、H22組和H22+BML-1

4、11組（1 mg/kg，0.1 ml/次）。實驗過程中記錄并觀察小鼠的一般情況和腫瘤生長狀況；于腫瘤細胞接種后第21天取各組小鼠血清，用免疫酶方法測定血清中VEGF的表達；采用頸椎脫臼法處死各組實驗小鼠，測定各組小鼠腫瘤體積并計算腫瘤生長抑制率（IR)；H&E染色后光鏡下對各組腫瘤進行病理組織學(xué)檢查，并觀察腫瘤自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移的情況；免疫組織化學(xué)法用來檢測腫瘤組織內(nèi)血管生成及HIF-1α的表達情況。
　　 結(jié)果：⑴ LXA4呈劑量依

5、賴性抑制H22細胞分泌VEGF（*P<0.05）；⑵ LXA4呈劑量依賴性下調(diào)H22細胞中HIF-1α的表達（*P<0.05）；⑶ 整體實驗中，BML-111降低小鼠血清中VEGF以及腫瘤組織中HIF-1α的表達水平（*P<0.05）；⑷ 病理組織學(xué)檢測結(jié)果顯示，H22+BML-111組小鼠腫瘤組織內(nèi)，CD34抗原表達陽性少（*P<0.05），腫瘤血管生成受到抑制；⑸ BML-111抑制小鼠原發(fā)性腫瘤的生長，IR=80.78%；⑹ BM