滋補脾陰方藥保護譜系限制性神經前體細胞抗過氧化損傷的實驗研究.pdf

1、背景：脊髓損傷是骨科的常見多發(fā)傷，后果嚴重，預后差，臨床治療效果尚不滿意。近年來人們逐漸認識到脊髓損傷后的永久性神經損害是原發(fā)損傷引起的一系列繼發(fā)反應所致。通過大量研究，有學者認為可以通過神經干細胞移植治療脊髓損傷，而譜系限制性神經前體細胞(NRPs細胞)是目前較好的選擇。然而在不斷改進移植方式的同時，人們發(fā)現(xiàn)損傷脊髓的局部微環(huán)境對移植的成敗也起到了至關重要的作用。 我校長期對“滋補脾陰方藥”進行研究，發(fā)現(xiàn)其有保護脊髓繼發(fā)損傷，

2、提高腦神經線粒體膜抗氧化的能力。本藥是否可以克服損傷脊髓微環(huán)境，提高移植細胞存活率是一嶄新課題，有待于進一步研究。 目的：研究滋補脾陰方藥對過氧化氫(H2O2)誘導限制性神經元前體細胞(NRPs細胞)脂質過氧化損傷的保護作用，為進一步體內移植實驗治療脊髓損傷奠定基礎。 方法：取SD大鼠胚胎脊髓，行原位免疫熒光鑒定確認為NRPs細胞。將脊髓消化吹打后貼壁培養(yǎng)3-5天，利用流式細胞儀行抗Nestin、抗PSA-NCAM、抗A

3、285免疫熒光鑒定，確認培養(yǎng)的細胞為NRPs細胞。利用紅外光譜對含藥血清和空白血清成分進行測定，確認含藥血清和空白血清成分有所不同，滋補脾陰方藥確實進入到血清中。建立實驗模型，將細胞分為正常組、損傷組、空白血清干預組、中藥血清干預組、空白血清干預后損傷組、中藥血清干預后損傷組。其中血清濃度分別為0.25％、0.5％、1％、2％、4％，預保護時間為8小時;H2O2濃度分別為0.05、0.1、0.2mmol/L，損傷時間為4小時。將各組于倒

4、置相差顯微鏡下對細胞進行一般形態(tài)學觀察和分組比較；利用MTT法計算各組細胞存活率：并對各組進行Hoechst染色，于倒置熒光顯微鏡下觀察細胞凋亡情況：檢測細胞內SOD、MDA含量，得知細胞狀態(tài)和受損程度，確定滋脾陰方藥血清保護作用及最佳保護濃度。 結果：H2O2可造成細胞MDA增高，SOD下降，符合脂質過氧化特征,并使細胞存活率降低，加快細胞凋亡，與H2O2濃度呈正性關系。滋補脾陰方藥在0.25-2％濃度下對H2O2誘導的過氧化

5、損傷細胞有保護作用，可以提高細胞存活率，預防NRPs細胞在脂質過氧化損傷下SOD的減少，并抑制MDA的生成。且在1％濃度時最保護能力最強。但含藥血清大于4％濃度后便呈現(xiàn)出較明顯的藥理毒性作用，可以加快細胞的凋亡。 結論：滋補脾陰方藥血清在一定濃度下有抗脂質過氧化損傷作用，可以預防細胞SOD下降，減少MDA生成，提高了NRPs細胞在脂質過氧化條件下的存活率和存活狀態(tài)，且在1％濃度時能發(fā)揮最佳保護作用。而空白血清對NRPs細胞無明顯