碘過量對FRTL細胞過氧化損傷的實驗研究.pdf

1、目的:研究過量碘化鉀(KI)對Fisher大鼠甲狀腺細胞(FRTL)線粒體超氧化物生成、細胞活力及細胞凋亡的影響,探討碘過量對FRTL細胞過氧化損傷的發(fā)生、發(fā)展過程和機制,并用促甲狀腺激素(TSH)或丙基硫氧嘧啶(PTU)進行干預(yù),研究其對碘過量導(dǎo)致的FRTL細胞過氧化損傷的影響。
　　 方法:
　　 1.應(yīng)用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法檢測不同濃度(10-7mol/L～10-2mol/L)KI對FRTL細胞活力的影響

2、,相應(yīng)濃度氯化鉀(KCl)作為滲透壓對照。
　　 2.分別用10-4 mol/L、10-2mol/L KI處理2h、4h、24h,利用MitoSOX通過流式細胞術(shù)和熒光顯微鏡檢測FRTL細胞線粒體超氧化物生成,利用免疫細胞化學(xué)法和酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)檢測FRTL細胞內(nèi)細胞色素C(cyt c)釋放,利用乳酸脫氫酶(LDH)測定試劑盒檢測細胞培養(yǎng)液上清的LDH活力,利用碘化丙啶(PI)通過流式細胞術(shù)檢測死亡細胞百分比(p

3、ercent of deadcells),DNA瓊脂糖電泳檢測DNA斷裂片段,透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)改變。
　　 3.用10-4mol/LKI加或不加10U/LTSH處理24h,檢測FRTL細胞線粒體超氧化物生成和細胞活力。
　　 4.用10-4mol/LKI加或不加300μmol/L PTU處理2h、24h,檢測FRTL細胞線粒體超氧化物生成和細胞活力。
　　 結(jié)果:
　　 1.處理30min,10-7～

4、10-2mol/L KI或KCl不影響FRTL細胞活力；處理24h,10-5～10-22mol/L KI明顯降低FRTL細胞活力,10-7～10-2mol/LKCl不影響細胞活力。
　　 2.碘過量對FRTL細胞過氧化損傷的時效性
　　 (1)處理2h、4h、24h,FRTL細胞內(nèi)超氧化物生成增加,以2h增加最明顯。
　　 (2)處理2h、4h、24h,cyt C釋放增加,4h最明顯。
　　 (3)處理4

5、h、24h,培養(yǎng)液上清LDH活力明顯增加,死亡細胞百分比升高。
　　 (4)處理24h,出現(xiàn)DNA ladder。
　　 (5)電鏡下處理2h,線粒體腫脹,4h細胞膜、線粒體膜溶解、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張、髓磷體形成,24h凋亡小體出現(xiàn)。
　　 3.TSH或PTU對碘過量導(dǎo)致的FRTL細胞過氧化損傷的影響
　　 (1)處理24h,KI+TSH組線粒體超氧化物生成明顯低于KI組,細胞活力明顯高于KI組。
　　

6、(2)處理2h,KI+PTU組線粒體超氧化物生成明顯低于KI組,處理24h,KI+PTU組細胞活力明顯高于KI組。
　　 結(jié)論:
　　 1.KI對FRTL細胞活力的影響具有濃度依賴性。
　　 2.碘過量對FRTL細胞過氧化損傷具有時效性,2h導(dǎo)致線粒體氧化損傷,伴有cyt c釋放,4h細胞膜受損,線粒體膜溶解,24h細胞損傷進一步加重,并出現(xiàn)細胞凋亡。
　　 3.TSH(10U/L)在一定程度上可以減輕碘