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文檔簡介
1、目的:糖尿病腦病是糖尿病的慢性并發(fā)癥之一,但目前糖尿病腦病的發(fā)病機制還不十分清楚。大量的流行病學(xué)調(diào)查證實了阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)與糖尿病這兩種疾病發(fā)病的相關(guān)性,發(fā)現(xiàn)糖尿病是AD的危險因素之一。AD的主要病理特征是神經(jīng)細胞外大量以β-淀粉樣蛋白(amyloidβpeptide,Ap)沉積為主的老年斑(senile plaques,SP)、神經(jīng)細胞內(nèi)神經(jīng)原纖維纏結(jié)(neurofibrillary tan
2、gles,NFTs)等。Aβ的聚集和沉積促發(fā)炎癥級聯(lián)反應(yīng)、神經(jīng)原纖維纏結(jié)、軸突損傷和突觸丟失及神經(jīng)元變性甚至死亡,影響認知功能。因此研究Aβ在糖尿病腦病中沉積情況有助于理解糖尿病腦病的發(fā)病機制,并為防治糖尿病腦病提供新方向和新思路。 滋補脾陰方藥(Zibu Piyin Recipe,ZBPYR)是戰(zhàn)麗彬教授以清代吳澄《不居集》的資成湯為基礎(chǔ)并結(jié)合多年實踐化裁而成,以滋補脾陰為立方原則,針對脾陰虛證而設(shè)。本課題組以往研究表明,ZB
3、PYR具有顯著的神經(jīng)保護和抗腦衰老作用;具有抗Aβ1-40毒性改善脾陰虛癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙及保護原代海馬神經(jīng)元的作用。因此本實驗進一步觀察ZBPYR是否對脾陰虛糖尿病腦病大鼠存在腦保護作用并探討其保護機制。 方法: 1.將健康成年雄性SD大鼠隨機分為空白對照組、脾陰虛組、糖尿病腦病組、脾陰虛糖尿病腦病組和脾陰虛糖尿病腦病+ZBPYR組,共5組。 2.首先采用高脂飲食加低劑量鏈脲佐菌素(30mg/kg,腹腔注射)
4、制備2型糖尿病模型,在此基礎(chǔ)上用飲食不節(jié)、勞倦過度、耗傷陰液的復(fù)合因素方法建立脾陰虛證模型。停止施加造模因素后,對脾陰虛糖尿病腦病大鼠給予ZBPYR干預(yù),并觀察各組大鼠的體征變化。 3.通過跳臺測試和Morris水迷宮測試進行行為學(xué)檢測,比較各組大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的變化。 4.通過免疫組織化學(xué)法檢測各組大鼠海馬Ap沉積情況;通過Wersten blotting方法檢測各組大鼠海馬GSK-3α、GSK-3α(Ser21)
5、磷酸化表達的變化。 結(jié)果: 1.高脂飼料喂養(yǎng)4周后,大鼠出現(xiàn)了體重增長(P<0.05)。STZ注射后糖尿病模型大鼠出現(xiàn)了多飲、多食、多尿等表現(xiàn),葡萄糖耐量異常(P<0.01),胰島素耐量異常,空腹血清胰島素水平無顯著變化(P>0.05)。 2.脾陰虛組出現(xiàn)體重下降、肛溫升高、飲水量增加等陰虛內(nèi)熱征象。行為學(xué)結(jié)果表明糖尿病腦病組、脾陰虛糖尿病腦病組學(xué)習(xí)記憶成績降低(P<0.05),脾陰虛糖尿病腦病+ZBPYR組陰虛
6、表現(xiàn)和學(xué)習(xí)記憶成績均有所改善(P<0.05)。 3.免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)糖尿病腦病組和脾陰虛糖尿病腦病組海馬神經(jīng)元胞漿Ap表達比對照組增多(分別為P<0.01和P<0.05),ZBPYR治療降低了脾陰虛糖尿病腦病大鼠海馬神經(jīng)元胞漿Aβ表達(P<0.05)。 4.Wersten blotting檢測發(fā)現(xiàn)各組大鼠海馬GSK-3α蛋白水平無顯著性差異。與對照組相比,糖尿病腦病組和脾陰虛糖尿病腦病組海馬GSK-3α(Ser21)磷酸
7、化水平顯著升高(分別為P<0.05,P<0.01),脾陰虛糖尿病腦病+ZBPYR組海馬GSK-3a(Ser21)磷酸化水平無顯著變化(P>0.05)。 結(jié)論: 1.高脂飲食加低劑量鏈脲佐菌素制備的2型糖尿病模型基礎(chǔ)上建立脾陰虛證模型,所建立的脾陰虛糖尿病腦病病證結(jié)合模型能夠較好的模擬臨床糖尿病腦病的行為學(xué)改變,可作為較好的糖尿病腦病的動物模型。 2.糖尿病腦病認知功能障礙可能和腦Aβ表達增加有關(guān)。 3.Z
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