Aβ在脾陰虛糖尿病腦病大鼠腦組織的表達及滋補脾陰方藥作用機制.pdf

1、目的：糖尿病腦病是糖尿病的慢性并發(fā)癥之一，但目前糖尿病腦病的發(fā)病機制還不十分清楚。大量的流行病學調查證實了阿爾茨海默?。ˋlzheimer's disease，AD）與糖尿病這兩種疾病發(fā)病的相關性，發(fā)現糖尿病是AD的危險因素之一。AD的主要病理特征是神經細胞外大量以β-淀粉樣蛋白（amyloidβpeptide，Ap）沉積為主的老年斑（senile plaques，SP）、神經細胞內神經原纖維纏結（neurofibrillary tan

2、gles，NFTs）等。Aβ的聚集和沉積促發(fā)炎癥級聯反應、神經原纖維纏結、軸突損傷和突觸丟失及神經元變性甚至死亡，影響認知功能。因此研究Aβ在糖尿病腦病中沉積情況有助于理解糖尿病腦病的發(fā)病機制，并為防治糖尿病腦病提供新方向和新思路。 滋補脾陰方藥（Zibu Piyin Recipe，ZBPYR）是戰(zhàn)麗彬教授以清代吳澄《不居集》的資成湯為基礎并結合多年實踐化裁而成，以滋補脾陰為立方原則，針對脾陰虛證而設。本課題組以往研究表明，ZB

3、PYR具有顯著的神經保護和抗腦衰老作用；具有抗Aβ1-40毒性改善脾陰虛癡呆大鼠學習記憶障礙及保護原代海馬神經元的作用。因此本實驗進一步觀察ZBPYR是否對脾陰虛糖尿病腦病大鼠存在腦保護作用并探討其保護機制。 方法： 1.將健康成年雄性SD大鼠隨機分為空白對照組、脾陰虛組、糖尿病腦病組、脾陰虛糖尿病腦病組和脾陰虛糖尿病腦病+ZBPYR組，共5組。 2.首先采用高脂飲食加低劑量鏈脲佐菌素（30mg/kg，腹腔注射）

4、制備2型糖尿病模型，在此基礎上用飲食不節(jié)、勞倦過度、耗傷陰液的復合因素方法建立脾陰虛證模型。停止施加造模因素后，對脾陰虛糖尿病腦病大鼠給予ZBPYR干預，并觀察各組大鼠的體征變化。 3.通過跳臺測試和Morris水迷宮測試進行行為學檢測，比較各組大鼠空間學習記憶能力的變化。 4.通過免疫組織化學法檢測各組大鼠海馬Ap沉積情況；通過Wersten blotting方法檢測各組大鼠海馬GSK-3α、GSK-3α（Ser21）

5、磷酸化表達的變化。 結果： 1.高脂飼料喂養(yǎng)4周后，大鼠出現了體重增長（P<0.05）。STZ注射后糖尿病模型大鼠出現了多飲、多食、多尿等表現，葡萄糖耐量異常（P<0.01），胰島素耐量異常，空腹血清胰島素水平無顯著變化（P>0.05）。 2.脾陰虛組出現體重下降、肛溫升高、飲水量增加等陰虛內熱征象。行為學結果表明糖尿病腦病組、脾陰虛糖尿病腦病組學習記憶成績降低（P<0.05），脾陰虛糖尿病腦病+ZBPYR組陰虛

6、表現和學習記憶成績均有所改善（P<0.05）。 3.免疫組化檢測發(fā)現糖尿病腦病組和脾陰虛糖尿病腦病組海馬神經元胞漿Ap表達比對照組增多（分別為P<0.01和P<0.05），ZBPYR治療降低了脾陰虛糖尿病腦病大鼠海馬神經元胞漿Aβ表達（P<0.05）。 4.Wersten blotting檢測發(fā)現各組大鼠海馬GSK-3α蛋白水平無顯著性差異。與對照組相比，糖尿病腦病組和脾陰虛糖尿病腦病組海馬GSK-3α（Ser21）磷酸

7、化水平顯著升高（分別為P<0.05，P<0.01），脾陰虛糖尿病腦病+ZBPYR組海馬GSK-3a（Ser21）磷酸化水平無顯著變化（P>0.05）。 結論： 1.高脂飲食加低劑量鏈脲佐菌素制備的2型糖尿病模型基礎上建立脾陰虛證模型，所建立的脾陰虛糖尿病腦病病證結合模型能夠較好的模擬臨床糖尿病腦病的行為學改變，可作為較好的糖尿病腦病的動物模型。 2.糖尿病腦病認知功能障礙可能和腦Aβ表達增加有關。 3.Z