新型K-,ATP-開放劑埃他卡林對原代培養(yǎng)人肺動脈平滑肌細胞TGF-β-,1-、PCNA mRNA表達的影響.pdf

1、肺動脈高壓(Pulmonary artery hypertension，PAH)是慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary disease，COPD)發(fā)展為慢性肺源性心臟病(Chronic cor pulmonale)的關鍵環(huán)節(jié)。目前對PAH的發(fā)病機制尚未完全闡明，國內外對該病尚缺乏有效的治療手段。因此，對PAH形成機制的研究及其研發(fā)有效的防治藥物顯得尤為必要。 PAH患者肺血管阻力(Pulm

2、onary vascular resistance，PVR)和肺動脈壓(Pulmonary aerial pressure，PAP)持續(xù)增高的主要原因是肺動脈收縮和肺血管重構，而肺血管重構最大的特征是肺動脈平滑肌細胞(Pulmonary artery smooth muscle cells)增殖增加和(或)凋亡減少所致的肺動脈中層增厚。近年來，肺血管平滑肌細胞鉀通道在肺動脈重構中的作用日益引起人們的關注。鉀通道功能下降，細胞內K+外流減

3、少，細胞膜去極化，繼而引起細胞漿內游離Ca2+濃度(Cytoplasmic free Ca2+ concentration，[Ca2+]cyt)增加，刺激肺動脈平滑肌細胞增殖，進一步加重血管管壁重構；另一方面，肺動脈平滑肌細胞鉀通道功能下降，細胞內K+增多，凋亡性容積減少(Apoptotic volume decrease，AVD)作用減弱，胞漿胱門蛋白酶活性下降，細胞凋亡則減少，亦加重肺血管重構。目前，肺血管平滑肌細胞鉀通道主要分為以

4、下四類：(1)電壓依賴性鉀(Kv)通道，(2)Ca2+激活性鉀(KCa)通道，(3)二孔鉀(K2P)通道，(4)內向整流性鉀(KIR)通道。其中ATP敏感性鉀(KATP)通道是一類內向整流性鉀通道，其活性受胞內ADP/ATP調控，因此，KATP通道將細胞代謝和膜電位相偶聯(lián)，已經成為研發(fā)新型治療PAH藥物的重要靶標。 埃他卡林(Iptakalim，IPT)是我國自行設計、合成的新型選擇性KATP開放劑。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，IPT

5、不僅降低大鼠缺氧性肺動脈高壓，逆轉大鼠缺氧性肺動脈重構和右心室肥厚；還抑制內皮素-1(Endothelin-1，ET-1)誘導的兔、人肺動脈平滑肌細胞[Ca2+]Cyt曾加和細胞增殖。 近年研究發(fā)現(xiàn)，轉化生長因子β1(Transforming growth factorbeta-1，TGF-β1)和增殖細胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen，PCNA)是肺動脈重構的重要細胞因子。并且本課

6、題研究亦發(fā)現(xiàn)，IPT能抑制大鼠缺氧性肺動脈高壓時肺動脈平滑肌細胞TGF-β1和PCNA表達。然而在原代培養(yǎng)人肺動脈平滑肌細胞中，IPT對TGF-β1、PCNA表達是否有作用，尚需進一步研究。 ET-1是導致肺動脈高壓時肺動脈平滑肌細胞增殖、肺動脈重構的重要活性物質。本文分別以ET-1和缺氧誘導細胞，研究IPT耐人肺動脈平滑肌細胞TGF-β1和PCNA表達的影響，以進一步探討KATP通道調控肺動脈重構的作用機制。 第一部分

7、：新型KATP開放劑埃他卡林對ET-1誘導原代培養(yǎng)人肺動脈平滑肌細胞TGF-β1、PCNA mRNA表達的影響 目的:觀察新型KATP開放劑埃他卡林(IPT)對ET-1誘導原代培養(yǎng)人肺動脈平滑肌細胞TGF-β1和PCNA mRNA表達的影響。 方法:分離3～4級人肺小動脈，按照組織貼塊法原代培養(yǎng)人肺動脈平滑肌細胞，應用實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應(RQ-RT-PCR)技術檢測TGF-β1和PCNA mRNA表達變化。

8、 結果:ET-1(10-5 mol·L-1)誘導人肺動脈平滑肌細胞TGF-β1、PCNA mRNA表達均增加；在相同條件下，加入ET-1(10-5 mol·L-1)的同時，分別在培養(yǎng)液中加入IPT10-7、10-6、10-5 mol·L-1，TGF-β1和PCNA mRNA表達分別呈濃度依賴性地下降；加入ET-1(10-5 mol·L-1)、IPT(10-5 mol·L-1)前30min，預先加入特異性KATP才吉抗劑格列本脲(G