非酒精性脂肪性肝病的發(fā)生、發(fā)展與腫瘤壞死因子-α及瘦素-2548基因多態(tài)性的相關(guān)性研究.pdf

1、背景：
　　隨著社會環(huán)境、生活方式、飲食習(xí)慣的改變，非酒精性脂肪性肝?。∟AFLD）已成為最常見的慢性肝臟疾病之一，其發(fā)病機(jī)制很復(fù)雜，和代謝綜合征（MS）密切相關(guān)，胰島素抵抗（IR）是中心環(huán)節(jié)。遺傳和環(huán)境因素相互作用可影響NAFLD的發(fā)生和發(fā)展。腫瘤壞死因子（TNF-α）是單核巨嗜細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、成纖維細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，也可在肝細(xì)胞、脂肪細(xì)胞及某些腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生，在炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)中起重要作用。TNF-α可直接作用于胰島素信號

2、轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)，又可誘生其他細(xì)胞因子如IL-6等，從而引IR。瘦素（Leptin）由脂肪組織分泌，與其受體結(jié)合后調(diào)節(jié)體內(nèi)能量平衡、血糖代謝、脂肪儲存及某些內(nèi)分泌功能。瘦素可抑制胰島素分泌和增加靶組織對胰島素的敏感性，影響NAFLD的發(fā)生和發(fā)展。臨床研究顯示NAFLD患者血漿TNF-α及瘦素水平與對照組比較存在顯著性差異，這和兩者基因的單核苷酸多態(tài)性（SNP）相關(guān)，其中TNF-α基因啟動子存在多個位點(diǎn)SNP，如G-238A、G-308A、C-8

3、57T、C-863T、T-1031C等；瘦素基因SNP位點(diǎn)有G-2548A、C-2549A、A nt+19G等。目前文獻(xiàn)可獲得的NAFLD與TNF-α或瘦素的相關(guān)性研究多是橫向研究，且研究的位點(diǎn)也不統(tǒng)一。我們前期的橫斷面流行病學(xué)調(diào)查顯示，TNF-α基因G-238A位點(diǎn)（而非G-308A位點(diǎn)）G→A變異增加NAFLD發(fā)病易感性，A等位基因通過增加患者血漿TNF-α水平而起作用。瘦素G-2548A位點(diǎn)等位基因?yàn)镚的患者血清瘦素水平明顯高于為

4、A的患者，從而改變機(jī)體對胰島素的敏感性和NAFLD發(fā)病易感性。
　　目的：
　　本研究在前期橫斷面調(diào)查的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步縱向追蹤這隊列人群4年，并擴(kuò)大研究位點(diǎn)，同時研究TNF-α三個位點(diǎn)（G-238A、G-308A、C-857T）及瘦素G-2548A位點(diǎn)，探討其SNPs與NAFLD發(fā)病易感性及病程進(jìn)展兩者的相關(guān)性，從分子水平探討NAFLD的發(fā)病機(jī)制。
　　方法：
　　在2005年6月至9月（基線）對廣東省3543例

5、普通人群進(jìn)行NAFLD流行病學(xué)調(diào)查的基礎(chǔ)上，2009年6月至9月（終點(diǎn)）我們用同樣方法回訪這隊列人群（中位數(shù)4.0年）。除外219人失訪，剩余的3324例中有696人愿意接受復(fù)查，納入本研究。對研究對象再次進(jìn)行問卷調(diào)查，內(nèi)容同前，包括一般情況、健康相關(guān)行為（飲酒、吸煙、飲食習(xí)慣、運(yùn)動情況）、疾病史等。測量腰圍、臀圍、身高、體重、血壓等臨床參數(shù)，并進(jìn)行血生化檢查（肝功能、空腹血糖、血脂、血清胰島素水平、超敏C-反應(yīng)蛋白、乙型和丙型肝炎標(biāo)志

6、物等）和腹部實(shí)時B超檢查。從外周靜脈血中提取DNA，應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性分析（PCR-RFLP）檢測 TNF-α三個位點(diǎn)：-238（rs361525）、-308（rs1800629）和-857（rs1799724）及瘦素-2548（rs7799039）的SNPs，用瓊脂糖凝膠電泳檢測目標(biāo)片段。數(shù)據(jù)統(tǒng)計采用數(shù)據(jù)分析軟件（SPSS16.0 for windows）處理，通過χ2檢驗(yàn)和有序logistic回歸分析研究各位點(diǎn)S

7、NP與NAFLD發(fā)病及病程進(jìn)展的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　2005年NAFLD標(biāo)化患病率為21.29％，至2009年顯著升高達(dá)46.11%（P＜0.05）。NAFLD組和對照組間性別差異不顯著（P＞0.05）；年齡、體重指數(shù)（BMI）、腰臀比（WHR）、收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、甘油三酯（TG）、空腹血糖（FPG）、空腹胰島素（FPI）、胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）、

8、超敏C-反應(yīng)蛋白（HS-CRP）等指標(biāo)在NAFLD組顯著高于對照組（P＜0.05）；而總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）在兩組間的差異未達(dá)顯著性（P＞0.05）。NAFLD組MS患病率為37.3%，顯著高于對照組8.3%（P＜0.05）。Hardy-Weinberg檢驗(yàn)提示TNF-α-238位點(diǎn)各基因頻率未達(dá)到遺傳平衡（P＜0.05），故于剔除，TNF-α-308、TNF-α-857和瘦素-2548位點(diǎn)納入

9、研究。χ2檢驗(yàn)顯示，NAFLD組與對照組相比，TNF-α-857和瘦素-2548位點(diǎn)的基因型及等位基因頻率差異均達(dá)顯著性（P＜0.05），NAFLD患者中TNF-α-857等位基因T型者的發(fā)病危險比率（RR）是對照組的1.463倍，瘦素-2548等位基因A發(fā)病的RR是對照組的1.105倍；而TNF-α-308位點(diǎn)基因型及等位基因頻率在兩組間無顯著差異（P＞0.05）。有序logistic回歸分析顯示，性別對NAFLD病程進(jìn)展無顯著影響（

10、P＞0.05），年齡影響顯著（P＜0.001）；校正性別和年齡后，TNF-α-857位點(diǎn) T/T基因型和NAFLD病程進(jìn)展正相關(guān)，其危險性比值比率（OR）是C/C型的8.65倍(P＜0.001)，而C/T型與C/C型比較差異未達(dá)顯著性（P=0.072）；TNF-α-308和瘦素-2548位點(diǎn)各基因型對NAFLD病程進(jìn)展均無顯著性影響（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.TNF-α-857位點(diǎn)C→T變異（而非TNF-α-30