肝細胞癌中CDKN2A基因甲基化及在臨床上應(yīng)用的研究.pdf

1、南開大學(xué)博士學(xué)位論文9689工5肝細胞癌中∞—黝基因甲基化及在臨床上應(yīng)用的研究天津市重點科技攻關(guān)專項(05YFsJsF02500)、天津市重點基金(033801011)資助培養(yǎng)院系：生僉科堂堂醫(yī)一級學(xué)科：壘塹堂二級學(xué)科：選僮堂論文作者：揚越指導(dǎo)教師：塞塞苴麴攫南開大學(xué)研究生院2006年4月摘要是MSP引物。這一設(shè)計使得BSMSP除具體普通巢式PCR的高靈敏度和高特異性外，還可以在第一次PCR中對模板的質(zhì)量進行評估以避免進一步的假性結(jié)果產(chǎn)

2、物，而且，其產(chǎn)物還可同時用于甲基化與非甲基化特異性擴增。在我國及亞洲其他地區(qū)，肝癌的發(fā)生常與HBV感染相關(guān)。根據(jù)這一特點，本文利用BSMSP技術(shù)對40例HBV相關(guān)肝癌中cD刪捌基因的甲基化情況進行了檢測。結(jié)果除3例標本因模板質(zhì)量而無法檢測外，其余有78％(29／37)的病例在癌組織有甲基化發(fā)生。目前國內(nèi)尚無對HBV相關(guān)肝癌CDKⅣ2A基因甲基化的研究，但這一結(jié)果與日本和韓國這兩個亞洲國家報道甲基化發(fā)生率(分別為727％和833％)比較接

3、近。同時，通過與其他小組的研究結(jié)果相比較可以發(fā)現(xiàn)，肝癌組織中HBV的存在可能會導(dǎo)致基因甲基化的發(fā)生率要高于那些沒有病毒感染背景的肝癌。對術(shù)后切緣部位的檢查不僅是對手術(shù)療效進行評估的必要手段，而具對于病人的預(yù)后也有一定意義；但是常規(guī)的組織病理學(xué)方法并不能及時有效地發(fā)現(xiàn)那些微小的癌前病灶或新發(fā)腫瘤，因此目前已有很多分子生物學(xué)的方法開始用于切緣檢查。本文首次將基因甲基化檢測的技術(shù)應(yīng)用于肝癌的切緣分析，以研究切緣部位在表觀遺傳學(xué)上的異常改變。在

4、20例肝癌手術(shù)切除的肝組織中，有35％(7／20)在切緣上存在CDK^24基因的甲基化。這個結(jié)果表明，在相當～部分組織病理學(xué)檢查為陰性的切緣上，通過靈敏度較高的分子生物學(xué)技術(shù)還是能夠檢測到基因組在表觀遺傳學(xué)上的異常改變?；诨蚣谆姆肿忧芯壏治鰧τ谛g(shù)后肝癌病人的預(yù)后可能具有一定的意義，但切緣處基因異常甲基化的發(fā)生是否最終會導(dǎo)致成新生腫瘤，并導(dǎo)致肝癌術(shù)后的局部復(fù)發(fā)，這還需要通過更長時間的隨訪并獲得相關(guān)病理資料后才能進行研究。在表觀遺傳

5、學(xué)的基礎(chǔ)理論方面，對于在甲基化向持家基因啟動子區(qū)的延伸過程有兩種觀點，即“漸進式”和“全或無”兩種方式。前者認為基因的甲基化是隨著細胞的增殖和傳代逐漸向原本受到保護區(qū)域擴散，這～過程是個甲基化與去甲基化同時發(fā)生的動態(tài)過程；而后者則認為甲基化的發(fā)生是個一過性的事件，它在很短的時間內(nèi)即可覆蓋整個CpG島。本文通過COBRA、MSSSCP及MSP產(chǎn)物直接測序等方法，對7例肝細胞癌的癌組織、癌旁組織和切緣組織中CD心它4基因甲基化模式和水平進行