鎘對(duì)華溪蟹的損傷與低分子量殼聚糖的防護(hù)作用.pdf

1、本論文采用了急性鎘(Cd2+)染毒的實(shí)驗(yàn)方法，分別設(shè)置了:空白對(duì)照組、3個(gè)Cd2+濃度組(29、58、87mg/L)、3個(gè)不同濃度的低分子量殼聚糖(low molecular weightchitosan，LMWC)與Cd2+聯(lián)合作用組(58 Cd2++20mg/L LMWC、58 Cd2++40mg/LLMWC和58 Cd2++80mg/L LMWC)，經(jīng)處理96h后，研究對(duì)長(zhǎng)江華溪蟹（Sinopotamonyangtsekiense

2、）肝胰腺、鰓、心臟和肌肉四種組織的損傷程度。首先，采用2，4-二硝基苯肼(DNPH)比色法測(cè)定了組織中蛋白質(zhì)羰基(protein carboyl，PCO)含量;KCl-SDS沉淀法測(cè)定了DNA與蛋白質(zhì)交聯(lián)率(DNA-protein crosslinks coefficient，DPC)。其次，就Cd2+對(duì)四種組織中一氧化氮(nitric oxide，NO)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthas

3、e，iNOS)及與鈣穩(wěn)態(tài)相關(guān)的兩種酶，Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活力的影響及不同濃度LMWC與Cd2+聯(lián)合作用進(jìn)行了研究。還有，為了進(jìn)一步探討Cd2+致機(jī)體毒性作用機(jī)理及LMWC對(duì)機(jī)體的防護(hù)作用，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法，測(cè)定了四種組織中金屬硫蛋白mRNA(MT mRNA)的表達(dá)。結(jié)果顯示:
　　(1)經(jīng)Cd2+作用后，肝胰腺、鰓、心臟和肌肉四種組織中PCO含量和DPC交聯(lián)率均呈現(xiàn)升高趨勢(shì)，其中在58、8

4、7mg/L Cd2+作用下，肝胰腺和鰓中PCO含量顯著增加，且DPC交聯(lián)率顯著升高;但是心臟和肌肉中兩種指標(biāo)均無(wú)顯著變化。當(dāng)LMWC與Cd2+聯(lián)合作用后，與Cd2+單獨(dú)作用相比，肝胰腺和鰓組織中PCO含量均顯著下降，而心臟和肌肉中的PCO含量變化不顯著;肝胰腺、鰓、心臟、肌肉四種組織中DPC都有顯著或極顯著下降。
　　(2)隨著Cd2+濃度增加，肝胰腺和鰓組織中的NO含量顯著增加，心臟和肌肉中NO含量無(wú)顯著變化;當(dāng)鎘濃度58mg/

5、L時(shí)，肝胰腺組織中iNOS活力極顯著升高，鰓組織iNOS活力顯著升高，而心臟和肌肉中iNOS活力變化不顯著。當(dāng)LMWC與Cd2+聯(lián)合作用后，與Cd2+單獨(dú)作用相比，在濃度58mg/L Cd2++80mg/L LMWC時(shí)，肝胰腺、鰓和肌肉組織中NO含量顯著下降，而心臟中NO含量變化不顯著;iNOS活力變化趨勢(shì)與NO的變化類(lèi)似。
　　(3)當(dāng)Cd2+單獨(dú)作用時(shí)，肝胰腺和鰓組織中Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase的活力顯

6、著下降，且當(dāng)Cd2+濃度58、87mg/L時(shí)，鰓中Na+-K+-ATPase的活力有極顯著下降，肝胰腺有顯著下降，而心臟和肌肉組織變化不顯著;Ca2+-ATPase活力變化趨勢(shì)與Na+-K+-ATPase的變化趨勢(shì)相同。當(dāng)LMWC與Cd2+聯(lián)合作用時(shí)，與Cd2+單獨(dú)作用相比，肝胰腺和鰓組織中Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活力均顯著升高，而心臟和肌肉組織中Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活力變化不顯著

7、。
　　(4)在較高濃度58mg/L Cd2+脅迫下，肝胰腺和鰓組織中MT mRNA表達(dá)顯著升高;肌肉組織在29mg/L Cd2+時(shí)表達(dá)顯著升高，而心臟組織中的表達(dá)在各個(gè)劑量組均無(wú)顯著性變化。與58mg/L Cd2+單獨(dú)作用相比， LMWC與Cd2+聯(lián)合作用，四種組織中MT mRNA的表達(dá)呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，其中肝胰腺和鰓組織中MT mRNA的表達(dá)下降較顯著，而心臟和肌肉中的下降無(wú)顯著性差異。
　　結(jié)論:
　　(1)鎘脅迫下

8、，長(zhǎng)江華溪蟹四種組織中的PCO含量和DPC均升高，且具有組織差異性;當(dāng)LMWC與Cd2+聯(lián)合作用時(shí)，PCO含量和DPC減少。LMWC對(duì)鎘引起的蛋白質(zhì)氧化損傷有一定保護(hù)作用。
　　(2)鎘能抑制長(zhǎng)江華溪蟹四種組織中Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活力;在LMWC與鎘聯(lián)合作用下，Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活力有一定程度的升高，有助于維持細(xì)胞內(nèi)的鈣穩(wěn)態(tài)。
　　(3)鎘能使長(zhǎng)江華溪蟹四種組織