低分子量魚精蛋白的制備與評價(jià).pdf

1、硫酸魚精蛋白作為抗肝素藥物被中華人民共和國藥典(2010年版)收錄，臨床主要適用于肝素中毒的解救。硫酸魚精蛋白通過注射給藥，但其屬外源蛋白，易引起過敏等不良反應(yīng)，在使用時(shí)會(huì)受到諸多限制。低分子量魚精蛋白(Low Molecular Weight Protamine，LMWP)是一段來源于魚精蛋白的多肽，可以酶解硫酸魚精蛋白制備。LWMP保留了魚精蛋白抗肝素的能力，同時(shí)又具有類似于TAT、寡聚精氨酸的穿膜肽性質(zhì)，能與口服難吸收的大分子藥物

2、形成復(fù)合物，從而促進(jìn)大分子藥物的口服吸收。
　　本論文從LMWP的檢測制備、制備純化和體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)等方面進(jìn)行研究，建立了LMWP的檢測方法，建立、完善制備工藝，采用物理混合的方式制備LMWP-胰島素復(fù)合物，并驗(yàn)證其具有提高胰島素生物利用度的作用，為后續(xù)口服胰島素給藥系統(tǒng)的開發(fā)提供參考，主要結(jié)論如下：
　　1)建立了LMWP的含量測定方法，比較了UPLC和HPLC這兩種檢測方法，發(fā)現(xiàn)UPLC法優(yōu)于HPLC法，并選擇UPLC法為后

3、續(xù)實(shí)驗(yàn)中LMWP的檢測方法；
　　2)建立并優(yōu)化了LMWP的制備和純化的方法，經(jīng)鑒定，制備純化后的產(chǎn)物為高純度LMWP；
　　3)通過Caco-2細(xì)胞模型建立的細(xì)胞攝取和轉(zhuǎn)運(yùn)試驗(yàn)，證明胰島素與LMWP結(jié)合后，相對于胰島素有更高的攝取和轉(zhuǎn)運(yùn)率，MTT實(shí)驗(yàn)證明，LMWP在整個(gè)課題實(shí)驗(yàn)中使用的濃度范圍內(nèi)沒有細(xì)胞毒性；
　　4)通過利用大鼠在體腸吸收模型，證明LMWP-胰島素復(fù)合物在小腸部位可被吸收，并具有降血糖作用，降血糖效