癌相關基因CXorf36功能的初步研究.pdf

1、目的：我們用生物信息學分析篩選得到一個在多種癌組織中高表達，而在癌旁正常組織低表達的新基因CXorf36(chromosome X open reading frame 36)，并用RT-PCR方法在組織和細胞系中加以驗證.以了解CXorf36在多種癌組織的陽性表達情況，從而希望得到一種篩查癌癥的新方法。 材料與方法： 1材料：標本選自河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院外科2006年1月至2007年12月的癌癥手術治療患者。786-O

2、、A498、Caki三種腎癌細胞系為北京大學人民醫(yī)院泌尿研究所提供。宮頸癌Hela、肝癌HepG2、結腸癌Lovo、肺腺癌A549、前列腺癌PC3細胞系為北京大學醫(yī)學部生化實驗室提供。 2方法：分別取肝癌，膽管癌，胃癌，結直腸癌，腎癌的病人(均術后病理檢查證實)手術切除的腫瘤標本癌組織和癌旁組織(位置距離癌組織至少5厘米)作對照。分為5組，分別為肝癌10例，膽管癌5例，胃癌15例，大腸癌10例，腎癌10例。組織標本行RT-PCR

3、方法檢測CXorf36mRNA在各組的表達情況。同時行RT-PCR方法檢測CXorf36mRNA在宮頸癌Hela、肝癌HepG2、結腸癌Lovo、肺腺癌A549、前列腺癌PC3細胞系和786-O、A498、Caki三種腎癌細胞系的表達情況。 3數據處理：所得結果運用SPSS10.0統(tǒng)計軟件包處理，每組計量資料均數比較采用t檢驗，五組計量資料間均數比較采用方差分析。以a=0.05為顯著性檢驗水準。 結果： 1癌組織

4、和癌旁正常組織中CXorf36 mRNA表達情況CXort36 mRNA在癌組織和癌旁正常組織表達情況，以均數±標準差表示，依次為：4.27±0.87、0.47±0.23。癌組織CXorf36 mRNA表達明顯高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.051)。CXorf36 mRNA在各組癌組織(肝癌組、膽管癌組、胃癌組、結直腸癌組、腎癌組)表達情況，以均數土標準差表示，依次為：4.39±0.8 1、4.10±0.97、4.28±0

5、.69、4.46±0.64、4.09±1.26，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。CXorf36 mRNA在各組癌旁正常組織(肝癌組、膽管癌組、胃癌組、結直腸癌組、腎癌組)的表達情況以均數士標準差表示，依次為：0.49±0.24、0.49±0.29、0.47±0.23、0.46±0.20、0.45±0.28，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 2肝癌癌組織和癌旁正常組織中CXorf36 mRNA表達情況CXorf36 mRNA在

6、肝癌癌組織和癌旁正常組織表達情況，以均數±標準差表示，依次為：4.39±0.81、0.49±0.24。肝癌癌組織CXorf36 mRNA表達明顯高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 3膽管癌癌組織和癌旁正常組織中CXorf36 mRNA表達情況CXorf36 mRNA在膽管癌癌組織和癌旁正常組織表達情況，以均數±標準差表示，依次為：4.10±0.97、0.49±0.29。膽管癌癌組織CXort36 mRNA表達明

7、顯高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 4結直腸癌癌組織和癌旁正常組織中CXorf36 mRNA表達情況 CXorf36 mRNA在結直腸癌癌組織和癌旁正常組織表達情況，以均數±標準差表示，依次為：4.28±0.69、0.47±0.23。結直腸癌癌組織CXorf36 mRNA表達明顯高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 5胃癌癌組織和癌旁正常組織中CXorf36 mRNA表達情況CXorf

8、36 mRNA在胃癌癌組織和癌旁正常組織表達情況，以均數±標準差表示，依次為：4.46±0.64、0.46±0.20。胃癌癌組織CXort36 mRNA表達明顯高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 6腎癌癌組織和癌旁正常組織中CXorf36 mRNA表達情況CXort36 mRNA在腎癌癌組織和癌旁正常組織表達情況，以均數±標準差表示，依次為：4.09±1.26、0.45±0.28。腎癌癌組織CXorf36 mR

9、NA表達明顯高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 7CXorf36基因mRNA在腫瘤細胞系中的表達情況CXorf36基因mRNA在3種腎癌細胞系(786-O、A498、Caki)以及前列腺癌細胞(PC3)、結腸癌細胞(LOVO)、宮頸癌細胞(Hela)、肺腺癌細胞(A549)、肝癌細胞(HepG2)中的表達豐度很低。 8CXorf36基因克隆和氨基酸序列分析： CXorf36基因序列全長由http

10、：//www.genome.ucsc.edu/獲得，編碼區(qū)序列全長用RT-PCR方法從癌組織總RNA擴增得到.推譯的蛋白含有182個氨基酸，預測分子量20.7kDa。氨基酸序列分析顯示CXorf36蛋白有六個絲氨酸磷酸化位點和兩個蘇氨酸磷酸化位點，沒有酪氨酸磷酸化位點。比對分析顯示CXorf36蛋白與小鼠來源的猜測蛋白LOC75905氨基端有79％的同源性，而該小鼠猜測蛋白可能是一種水解酶。 結論： 1CXorf36 m

11、RNA在惡性腫瘤中腫瘤組織有明顯高表達，說明Cxorf36基因可能參與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉移侵襲過程，并在其中發(fā)揮重要作用。 2CXorf36 mRNA在肝癌、膽管癌、結直腸癌、胃癌和腎癌的腫瘤組織明顯高表達，而在相對應的正常組織中表達明顯降低，說明肝癌、膽管癌、結直腸癌、胃癌和腎癌均為表達癌相關基因CXorf36的腫瘤譜。癌相關基因CXorf36可能作為腫瘤篩查監(jiān)測、檢測腫瘤是否侵襲轉移、以及判斷預后、了解早期復發(fā)的有效指