鼻咽癌候選轉(zhuǎn)移相關(guān)基因caveolin-1的初步研究.pdf

1、鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma)是我國南方省份及東南亞高發(fā)的一種惡性腫瘤，具有明顯的種族聚集性和地域性?，F(xiàn)在的研究認(rèn)為鼻咽癌是在多種因素協(xié)同作用下，經(jīng)過多步驟、多階段發(fā)生發(fā)展形成的，其發(fā)生可能與EBV病毒、理化環(huán)境因素、遺傳因素等有關(guān)。鼻咽癌具有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移早、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生率高等特點，但是目前對鼻咽癌侵襲和轉(zhuǎn)移的分子機制尚不十分清楚。 Cavcolin-1(Cav-1，窖蛋白或小窩蛋白)是胞膜窖cave

2、olae的主要結(jié)構(gòu)蛋白，由細(xì)胞膜內(nèi)陷形成，與小泡運輸，膽固醇穩(wěn)定和細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控相關(guān)。Cav-1在終末分化的細(xì)胞或者靜止的細(xì)胞中高表達(dá)，包括脂肪細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等。以往的研究表明，Cav-1基因作為候選抑瘤基因在細(xì)胞的增殖中起負(fù)性調(diào)控的作用。然而，很多研究小組證實，Cav-1在腫瘤轉(zhuǎn)移中高表達(dá)并能促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。 采用pSIJPER.retro干擾載體系統(tǒng)，構(gòu)建了針對caveolin-1(Cav-1)的RNA干擾載

3、體(shCav-1)。經(jīng)測序結(jié)果證實后，利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將shCav-1導(dǎo)入具有成瘤、高轉(zhuǎn)移特性的5-8F鼻咽癌細(xì)胞株，經(jīng)嘌呤霉素篩選獲得抗性克??；RT-PCR結(jié)果表明，shCav-1表達(dá)載體特異性的引起Cav-1的表達(dá)下調(diào)，Western Blot分析表明轉(zhuǎn)染了shCav-1的5-8F細(xì)胞中Cav-1的蛋白表達(dá)下調(diào)了95﹪以上，就此，我們已成功地建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染shCav-1的5-8F細(xì)胞株(5-8F-shCav-1)。 隨后，

4、我們進(jìn)一步考察了Cav-1的表達(dá)被干擾后對5-8F細(xì)胞的生物學(xué)特性的影響。流式細(xì)胞分析結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染shCav-1后5-8F細(xì)胞明顯發(fā)生G0/G1期阻滯現(xiàn)象。 平板克隆形成實驗和MTT比色法觀察5-8F-Cav-1細(xì)胞的增殖能力，以轉(zhuǎn)染pSIUPER．retro空白載體的5-8F細(xì)胞(5-8F-pSUPER．retro)作為對照，觀察5-8F-shCav-1細(xì)胞的增殖情況，結(jié)果表明5-8F-shCav-1細(xì)胞的增殖速度明顯低于對

5、照組。提示Cav-1被干擾后導(dǎo)致5-8F細(xì)胞的克隆形成能力和增殖能力降低。 利用Matrigel侵襲模型和劃痕實驗證實，Cav-1被干擾后5-8F細(xì)胞的侵襲能力和運動能力減弱。裸鼠腹腔內(nèi)接種后成瘤及轉(zhuǎn)移能力的比較分析結(jié)果進(jìn)一步提示，Cav-1被干擾后5-8F細(xì)胞的成瘤和轉(zhuǎn)移能力均下降。 本實驗利用RNA干擾技術(shù)，建立了穩(wěn)定表達(dá)shCav-1的干擾細(xì)胞株，成功地沉默了Cav-1基因在5-8F細(xì)胞中的表達(dá)；Cav-1基因被干