鼻咽癌患者發(fā)生肺轉(zhuǎn)移的預(yù)后分析及相關(guān)基因的檢測.pdf

1、目的：
　　通過觀察鼻咽癌患者發(fā)生肺轉(zhuǎn)移的治療方案及各項預(yù)后指標，對結(jié)果進行分析討論。同時通過基礎(chǔ)實驗建立鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma, NPC)的肺轉(zhuǎn)移可視化動物模型，構(gòu)建肺轉(zhuǎn)移細胞株，檢測相關(guān)的差異基因，根據(jù)文獻及實驗結(jié)果進行篩選后進行驗證。
　　方法：
　　收集2011年1月至2016年12月到溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院就診的鼻咽癌患者發(fā)生肺轉(zhuǎn)移病例44人，其中診斷鼻咽癌以病理學(xué)報告結(jié)果

2、為準，診斷肺轉(zhuǎn)移以增強C T影像學(xué)報告為主，患者中男性38人，女性6人，中位年齡51.5歲（17-81歲），治療上進行放療加化療26例，單獨化療13例，單純放射治療3例，未治療2例。運用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS中的Kaplan-Meier公式計算生存率，用 log-rank檢驗各組生存率。采用Cox逐步回歸模型進行多因素分析。同時采用中科院購買的鼻咽癌細胞株CNE，構(gòu)建穩(wěn)定表達熒光酶基因的CNE/Luc穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系，尾靜脈注射CNE/Luc懸液

3、到裸鼠中，利用動物活體成像系統(tǒng)篩選得到肺轉(zhuǎn)移裸鼠，分離腫瘤細胞，進行2次尾靜脈注射篩選得到肺部轉(zhuǎn)移的腫瘤細胞，運用熒光成像驗證其組織特異性轉(zhuǎn)移后，通過基因表達譜芯片技術(shù)，獲得鼻咽癌肺轉(zhuǎn)移相關(guān)的差異基因。
　　結(jié)果：
　　通過統(tǒng)計學(xué)分析全組患者1、2、3年生存率分別為65.9％、45.5%、29.5%,中位生存時間為25.33(0.24?97.2)個月。分成5個因素進行分析，年齡（大于60歲或小于等于60歲），治療方案（放療加

4、化療26例，單獨化療13例，單純放射治療3例，未治療2例），化療藥物方案（一線藥物23例，二線藥物9例，靶向藥物7例），轉(zhuǎn)移器官數(shù)目（多器官包括肝臟，骨骼等轉(zhuǎn)移患者32例，單純肺部轉(zhuǎn)移患者12例），經(jīng)過log-rank單因素分析顯示,年齡（P=0.5659)和性別（P=0.7598)不足以成為鼻咽癌肺轉(zhuǎn)移患者預(yù)后的影響因素，轉(zhuǎn)移器官數(shù)量(P=0.0044)是鼻咽癌肺轉(zhuǎn)移預(yù)后的影響因素。采用C o x逐步回歸模型多因素分析顯示，治療方案(

5、 P=0.0005)、化療藥物方案(P=0.0055)是鼻咽癌肺轉(zhuǎn)移預(yù)后的重要影響因素?；熕幬锓桨钢幸园邢蛩幬镏委煘橹鞯姆桨割A(yù)后明顯優(yōu)于其他藥物方案。根據(jù)靶向藥物治療有效的思路進行實驗設(shè)計，通過構(gòu)建動物活體成像的鼻咽癌肺轉(zhuǎn)移相關(guān)模型。之后利用基因芯片技術(shù)，構(gòu)建鼻咽癌原代細胞株CNE/Luc與鼻咽癌肺細胞轉(zhuǎn)移相關(guān)亞群CNE/Luc-2的基因表達譜。通過Pubmed文獻搜索以及相關(guān)基因分析軟件，從而篩選出可能與鼻咽癌患者出現(xiàn)肺轉(zhuǎn)移關(guān)系最為

6、密切的前10種基因，并尋找這些基因在文獻中已被證實與腫瘤發(fā)生相關(guān)的機制。這10個基因分別是 TP53，PIK3CA，MET，KRAS，VEGFA，EDNRB，GSK3B, FOXO3，SOD2，BIRC3。之后通過實時熒光P C R技術(shù)驗證后證明此10種基因在鼻咽癌肺轉(zhuǎn)移細胞中都有高表達，且以計算AACt代表目的基因相對對照基因的相對擴增倍數(shù)，可見其中高表達的基因以VEGFA、KRAS、TP53三者為著。
　　結(jié)論：
　　在

7、鼻咽癌發(fā)生肺轉(zhuǎn)移的患者中，轉(zhuǎn)移器官數(shù)量，治療方案，化療藥物方案是影響轉(zhuǎn)移性鼻咽癌預(yù)后的獨立因素，在化療藥物治療中又以基因靶向藥物的治療效果最佳。本文通過成功構(gòu)建動物活體成像模型，基因芯片技術(shù)以及文獻查閱法篩選出TP53，PIK3CA，M E T等10個基因，推測這些基因可能對于鼻咽癌的肺轉(zhuǎn)移有重要的調(diào)節(jié)作用。經(jīng)過實時熒光PCR技術(shù)分析驗證其確實在鼻咽癌肺轉(zhuǎn)移細胞中具有高表達，為下一步驗證鼻咽癌肺轉(zhuǎn)移發(fā)生的相關(guān)信號通路研究提供理論基礎(chǔ)，對