CD8+CD28-T細胞在日本血吸蟲感染免疫應(yīng)答過程中的調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、[目的]
　　1.觀察日本血吸蟲感染小鼠胸腺、脾臟T淋巴細胞上CD28分子的動態(tài)變化及吡喹酮治療后對CD28分子的影響。
　　2.觀察日本血吸蟲感染小鼠不同時間點CD8+CD28-T細胞在肝臟蟲卵肉芽腫周圍的分布及其在肝臟及外周血中比例的變化。
　　3.初步探討日本血吸蟲感染小鼠慢性期顯著升高的CD8+CD28-T細胞免疫調(diào)節(jié)機制及其來源。
　　4.觀察MSCs過繼治療對CD8+CD28-T細胞的影響及其對日本血

2、吸蟲感染小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。
　　[方法]
　　1.75只6～8周齡BALB/c雌鼠隨機分為感染0周、1周、2周、4周、6周、8周、10周組及同期對照組，每組5只，另一組5只作為吡喹酮治療組。每只小鼠感染10±2條尾蚴。吡喹酮治療組于感染第5周時開始給藥，給藥劑量為150mg/kg/d，灌胃，連續(xù)給藥3天，并于感染第8周時再次給藥，給藥劑量為300mg/kg/d，灌胃，連續(xù)給藥3天，于感染第10周時處理小鼠。HE染色檢測各組

3、小鼠胸腺、脾臟、肝臟病理變化，流式細胞術(shù)檢測各個時間點胸腺、脾臟T淋巴細胞上CD28分子的變化。
　　2.95只6～8周齡BALB/c雌鼠作為實驗對象。每只小鼠感染10±2條尾蚴。感染0周、4周、6周、8周、10周、12周時分別處死小鼠，收集血清，免疫熒光檢測CD8+CD28-T細胞在肝臟肉芽腫的分布情況，流式細胞術(shù)檢測小鼠肝臟、外周血單個核細胞中CD8+CD28-T細胞比例;流式分選感染10周小鼠脾臟中CD8+CD28-T細胞，

4、檢測其對脾臟效應(yīng)T細胞增殖的影響;檢測CD8+CD28-T細胞過繼治療后對肝臟肉芽腫性炎癥、膠原纖維沉積及機體免疫功能的影響;通過體內(nèi)外實驗探討日本血吸蟲感染慢性期大量升高的CD8+CD28-T的來源。
　　3.40只6～8周齡BALB/c雌鼠作為實驗對象。每只小鼠感染10±2條尾蚴。于感染急性期(2w、3w、4w)給予MSCs過繼治療，采用流式細胞術(shù)檢測過繼治療小鼠肝臟、脾臟、外周血中CD8+CD28-T細胞的比例，CCK-8檢

5、測脾細胞的增殖能力，肝臟HE及Masson染色檢測肝臟肉芽腫性炎癥及膠原纖維沉積程度。
　　[結(jié)果]
　　1.隨著感染進程，胸腺細胞中CD28-T細胞比例逐漸增加，而脾臟中CD28-T細胞比例到感染慢性期才開始增加。吡喹酮治療后只可以逆轉(zhuǎn)脾臟CD4+T細胞上CD28分子的表達，而對胸腺CD4+/CD8+T細胞及脾臟CD8+T細胞上CD28分子表達無影響。
　　2.流式法檢測結(jié)果顯示:隨著感染時間延長，外周血單個核細胞、

6、脾臟和胸腺中CD8+CD28-T細胞逐漸增加，而肝臟中這群細胞在感染早期比例較低，感染6周達到峰值后有所下降，進入慢性感染階段后又逐漸增加，同時肝臟免疫熒光與流式法檢測結(jié)果一致。
　　血吸蟲感染慢性期來源的CD8+CD28-T細胞過繼到感染急性期小鼠體內(nèi)后，與未過繼治療小鼠相比，過繼小鼠狀態(tài)明顯轉(zhuǎn)好、體重增加更明顯、肝臟肉芽腫結(jié)節(jié)減少、顏色變淺、脾臟較小，肝臟HE染色和Masson染色結(jié)果顯示，過繼治療后，蟲卵沉積及炎癥細胞浸潤明

7、顯減輕、肝臟膠原纖維沉積減少、肉芽腫數(shù)目明顯減少;這些病理變化的減輕可能與CD8+CD28-T細胞的能夠特異地募集到蟲卵肉芽腫周圍、抑制效應(yīng)T細胞（CD4+T細胞）增殖、抑制Th1型免疫應(yīng)答的功能有關(guān)。
　　3.體內(nèi)外實驗證實，SEA和SWA免疫小鼠脾臟和外周血單個核細胞CD8+CD28-T細胞都有明顯升高，其中SWA誘導(dǎo)脾臟細胞產(chǎn)生CD8+CD28-T細胞的能力更強，而SEA和SWA都不能通過誘導(dǎo)CD8+CD28+T細胞上CD2

8、8分子的丟失來生成CD8+CD28-T細胞。這說明日本血吸蟲感染慢性期CD8+CD28-T細胞主要由SWA誘導(dǎo)外周免疫器官而生成，具體機制有待進一步研究。
　　4.MSCs經(jīng)尾靜脈注射的方式過繼給日本血吸蟲感染急性期小鼠后，小鼠肝臟肉芽腫性炎癥減輕、肝臟膠原纖維沉積減少，脾細胞增殖能力減弱、肝臟CD8+CD28-T細胞比例明顯增加，而脾臟和外周血中該群細胞變化不明顯;這提示我們:上調(diào)感染小鼠體內(nèi)CD8+CD28-T細胞的比例使機體