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文檔簡介
1、目的:
研究CD4+CD45RBhighT細胞誘導嚴重聯(lián)合免疫缺陷(SCID)小鼠的慢性結腸炎癥小鼠模型的構建,以及日本血吸蟲感染對CD4+CD45RBhighT細胞誘導的小鼠結腸炎癥的病理變化及其腸系膜淋巴結與脾臟細胞因子分泌的影響,并初步探討該蠕蟲—SCID—T細胞模型的作用機制。
方法:
采用流式細胞分選儀分選出BALB/c小鼠脾臟、外周淋巴結以及腸系膜淋巴結的CD4+CD45RBhighT細胞,經腹
2、腔注射轉植進入具有相同背景基因型、同性別、同周齡的SCID小鼠(1.2~1.4×106/鼠)。將小鼠分為兩組,Ⅰ組為單純炎癥性腸病動物模型組,Ⅱ組經腹壁皮膚感染日本血吸蟲尾蚴(22±2條/鼠),為炎癥性腸病并日本血吸蟲感染組。每天觀察記錄小鼠體重變化、大便情況、毛發(fā)改變等。分別于細胞轉入后第2周、4周、6周、8周處死小鼠,觀察結腸組織學改變。取出脾臟和腸系膜淋巴結,研磨組織,獲取淋巴細胞懸液;以流式細胞技術檢測分析脾臟CD4+T細胞細胞
3、因子IFN-γ、IL-4表達;以ELISA法分別檢測腸系膜淋巴結和脾臟細胞培養(yǎng)上清液細胞因子IFN-γ、IL-4表達水平。
結果:
模型構建情況:CD4+CD45RBhighT細胞誘導的SCID小鼠腸炎模型構建成功。兩組小鼠在細胞轉入后1~2周開始出現不同程度的體重下降;兩組小鼠在觀察期間均出現不同程度的厭食、活動度減少、毛色失去光澤、豎毛、拱背、糞便變軟甚至腹瀉等臨床癥狀,偶見脫肛癥狀。
結腸組織病理改變
4、(HE染色結果):Ⅰ組小鼠第8周結腸組織病理評分明顯高于第4周,評分分別為5.5±0.5分和2.0±0.6分,差異顯著(P<0.05);Ⅱ組小鼠第4周結腸組織病理評分明顯高于Ⅰ組第4周,分別為5.8±0.8分和2.0±0.6分,差異顯著(P<0.05);Ⅱ組8周小鼠病理評分明顯低于Ⅰ組8周,分別為2.2±0.8分和5.5±0.5分,差異顯著(P<0.05)。
流式細胞儀檢測結果:4W:Ⅱ組Th1(IFN-γ)、Th2(IL-4
5、)、Th1/Th2比率分別為(43.48±6.24)%、(3.15±0.83)%、14.16±2.23,分別與Ⅰ組(28.37±3.66)%、(10.88±1.25)%、2.62±0.33相比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
8W:Ⅱ組Th1(IFN-γ)比率為(20.92±4.02)%與Ⅰ組(40.90±2.79)%相比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);Ⅱ組 Th2(IL-4)、Th1/Th2比率分別為(1.78±
6、0.77)%、12.81±4.30,分別與Ⅰ組(2.62±0.23)%、15.63±0.99相比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
ELISA檢測結果:4W:①Ⅱ組 SP細胞上清液 IFN-γ、IL-4濃度分別為(168.53±12.01)pg/ml、(65.46±9.85)pg/ml,分別與Ⅰ組(114.18±41.83)pg/ml、(130.06±18.56)pg/ml相比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);②Ⅱ組M
7、LN細胞上清液IFN-γ、IL-4濃度分別為(177.58±43.15)pg/ml、(70.01±2.96)pg/ml,分別與Ⅰ組(105.49±35.40)pg/ml、(172.33±37.39)pg/ml相比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
8W:①Ⅱ組SP細胞上清液IFN-γ、IL-4濃度分別為(104.89±25.13)pg/ml、(129.71±30.63)pg/ml,分別與Ⅰ組(213.58±38.70)pg
8、/ml、(86.78±24.96) pg/ml相比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);②Ⅱ組MLN細胞上清液IFN-γ、IL-4濃度分別為(94.09±14.82)pg/ml、(128.18±32.87),分別與Ⅰ組(193.05±49.70)pg/ml、(107.34±21.21)pg/ml相比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
結論:
CD4+CD45RBhighT細胞轉入SCID小鼠可以很好的制備出T細胞
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