日本血吸蟲感染對CD4+CD45RBhighT細胞誘導(dǎo)IBD影響的實驗研究.pdf

1、目的：
　　研究CD4+CD45RBhighT細胞誘導(dǎo)嚴重聯(lián)合免疫缺陷（SCID）小鼠的慢性結(jié)腸炎癥小鼠模型的構(gòu)建，以及日本血吸蟲感染對CD4+CD45RBhighT細胞誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎癥的病理變化及其腸系膜淋巴結(jié)與脾臟細胞因子分泌的影響，并初步探討該蠕蟲—SCID—T細胞模型的作用機制。
　　方法：
　　采用流式細胞分選儀分選出BALB/c小鼠脾臟、外周淋巴結(jié)以及腸系膜淋巴結(jié)的CD4+CD45RBhighT細胞，經(jīng)腹

2、腔注射轉(zhuǎn)植進入具有相同背景基因型、同性別、同周齡的SCID小鼠（1.2~1.4×106/鼠）。將小鼠分為兩組，Ⅰ組為單純炎癥性腸病動物模型組，Ⅱ組經(jīng)腹壁皮膚感染日本血吸蟲尾蚴（22±2條/鼠），為炎癥性腸病并日本血吸蟲感染組。每天觀察記錄小鼠體重變化、大便情況、毛發(fā)改變等。分別于細胞轉(zhuǎn)入后第2周、4周、6周、8周處死小鼠，觀察結(jié)腸組織學(xué)改變。取出脾臟和腸系膜淋巴結(jié)，研磨組織，獲取淋巴細胞懸液；以流式細胞技術(shù)檢測分析脾臟CD4+T細胞細胞

3、因子IFN-γ、IL-4表達；以ELISA法分別檢測腸系膜淋巴結(jié)和脾臟細胞培養(yǎng)上清液細胞因子IFN-γ、IL-4表達水平。
　　結(jié)果：
　　模型構(gòu)建情況：CD4+CD45RBhighT細胞誘導(dǎo)的SCID小鼠腸炎模型構(gòu)建成功。兩組小鼠在細胞轉(zhuǎn)入后1~2周開始出現(xiàn)不同程度的體重下降；兩組小鼠在觀察期間均出現(xiàn)不同程度的厭食、活動度減少、毛色失去光澤、豎毛、拱背、糞便變軟甚至腹瀉等臨床癥狀，偶見脫肛癥狀。
　　結(jié)腸組織病理改變

4、（HE染色結(jié)果）：Ⅰ組小鼠第8周結(jié)腸組織病理評分明顯高于第4周，評分分別為5.5±0.5分和2.0±0.6分，差異顯著（P<0.05）；Ⅱ組小鼠第4周結(jié)腸組織病理評分明顯高于Ⅰ組第4周，分別為5.8±0.8分和2.0±0.6分，差異顯著（P<0.05）；Ⅱ組8周小鼠病理評分明顯低于Ⅰ組8周，分別為2.2±0.8分和5.5±0.5分，差異顯著（P<0.05）。
　　流式細胞儀檢測結(jié)果：4W：Ⅱ組Th1（IFN-γ）、Th2（IL-4

5、）、Th1/Th2比率分別為（43.48±6.24）％、（3.15±0.83）%、14.16±2.23，分別與Ⅰ組（28.37±3.66）%、（10.88±1.25）%、2.62±0.33相比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　8W：Ⅱ組Th1（IFN-γ）比率為（20.92±4.02）%與Ⅰ組（40.90±2.79）%相比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；Ⅱ組 Th2（IL-4）、Th1/Th2比率分別為（1.78±

6、0.77）%、12.81±4.30，分別與Ⅰ組（2.62±0.23）%、15.63±0.99相比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　ELISA檢測結(jié)果：4W：①Ⅱ組 SP細胞上清液 IFN-γ、IL-4濃度分別為（168.53±12.01）pg/ml、（65.46±9.85）pg/ml，分別與Ⅰ組（114.18±41.83）pg/ml、（130.06±18.56）pg/ml相比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；②Ⅱ組M

7、LN細胞上清液IFN-γ、IL-4濃度分別為（177.58±43.15）pg/ml、（70.01±2.96）pg/ml，分別與Ⅰ組（105.49±35.40）pg/ml、（172.33±37.39）pg/ml相比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　8W：①Ⅱ組SP細胞上清液IFN-γ、IL-4濃度分別為（104.89±25.13）pg/ml、（129.71±30.63）pg/ml，分別與Ⅰ組（213.58±38.70）pg

8、/ml、（86.78±24.96） pg/ml相比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；②Ⅱ組MLN細胞上清液IFN-γ、IL-4濃度分別為（94.09±14.82）pg/ml、（128.18±32.87），分別與Ⅰ組（193.05±49.70）pg/ml、（107.34±21.21）pg/ml相比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　CD4+CD45RBhighT細胞轉(zhuǎn)入SCID小鼠可以很好的制備出T細胞