甲氧基歐芹酚納米制劑與氟康唑協(xié)同抗耐藥真菌作用.pdf

1、目的：本課題旨在通過研究甲氧基歐芹酚與氟康唑的相互作用，尋找能夠?qū)鼓退幇啄钪榫踩行У穆?lián)合用藥方案，為抗真菌藥物研究，尤其是水溶性差、口服生物利用度不高的抗真菌藥物研究提供新思路。
　　 方法：1.經(jīng)棋盤式微量稀釋實驗研究甲氧基歐芹酚(Ost)與氟康唑(FLC)的協(xié)同抗耐藥白念珠菌作用，并以體外瓊脂平板擴散實驗驗證兩藥協(xié)同作用。2。建立甲氧基歐芹酚HPLC體外分析方法，研究藥物的溶解度、油水分配系數(shù)等基本理化性質(zhì)。3.繪制標

2、準曲線，并對回收率，精密度，專屬性進行考察。4。以高分子聚合材料丙烯酸樹脂EudragitS100作為載體材料，以泊洛沙姆P188為乳化劑，采用乳化溶劑擴散法制備了納米粒(Ost-S100-NP)。5.以納米粒的平均粒徑、分布、包封率及載藥量為指標，采用正交設計綜合評價法優(yōu)化處方組成及工藝；6.透射電鏡觀察了納米粒子的表面形態(tài)并測定了平均粒徑與粒度分布。7.粉末X-射線衍射法和差示熱量掃描法對Ost-S100-NP進行鑒別；低溫超速離心

3、法分離納米粒，高效液相色譜法測定包封率。8.恒溫振蕩法對納米粒的在不同pH介質(zhì)中的體外釋藥進行研究；用動態(tài)透析法研究其體外釋藥特性。9.以Ost溶液為參比制劑，將納米粒對大鼠灌胃，研究其口服藥代動力學。10.通過系統(tǒng)性真菌感染小鼠體內(nèi)實驗進一步驗證Ost與氟康唑合用的抗真菌作用。
　　 結果：1.棋盤式微量稀釋實驗發(fā)現(xiàn)單用氟康唑耐藥的菌株，合用甲氧基歐芹酚后，菌株對氟康唑的敏感性增強，合用后氟康唑的平均MIC80為2.82μg/

4、ml，同時甲氧基歐芹酚的平均MIC80降到4.73μg/ml，平均協(xié)同指數(shù)為0.135。體外瓊脂平板擴散實驗驗證了以上結果，與任何一種藥物的單用效果相比，合用藥片的抑菌圈明顯擴大，邊界清晰，抑菌圈內(nèi)沒有菌落生長。而在無法抑制耐藥菌生長的64μg/ml氟康唑的瓊脂平板上，甲氧基歐芹酚藥片周圍顯現(xiàn)出明顯的抑菌圈。2.確定甲氧基歐芹酚的體外HPLC分析條件為：ODSC18(4.6mm×250mm，5um)色譜柱；流動相為乙腈-水(60:40)

5、；流速為1.0mL/min；檢測波長為321nm；柱溫為25℃；進樣量為20μL。3.以峰面積(y)對濃度(x)作回歸，得到線性方程為：y=68988x-11763，R=0.9997。線性范圍：1.027-90.080μg/mL，甲氧基歐芹酚量與色譜峰面積積分值呈良好的線性關系。甲氧基歐芹酚峰的保留時間為7.6min左右，而空白納米粒在相應位置無吸收峰出現(xiàn)，即載體材料和輔料不影響藥物的測定。4.以納米粒的平均粒徑、分布、包封率及載藥量為

6、指標，采用正交設計優(yōu)化處方組成為P188125mg；蒸餾水125mL；Ost50mg；EudragitS100200mg；油水比2:5；溫度30℃；攪拌速度400r/min。5.所得Ost-S100-NP平均粒徑為55.4±2.1nm；PDI(0.065±0。005)；包封率為(98.99±0.1)％；載藥量(23.85±0.2)％；回收率為(98.5±0.1)％；綜合評分0.362。6.以最佳工藝處方所制備的甲氧基歐芹酚納米粒粒徑分布

7、為單峰分布，粒徑分布范圍為25-120nm，平均粒徑為55.47nm。Ost-S100-NP在電鏡下為均勻規(guī)則的圓球形，沒有粘連的現(xiàn)象。7.XRD分析表明三者之間發(fā)生了較強的相互作用，結晶形態(tài)發(fā)生改變，形成了納米粒。DSC分析提示生成了新的物相，納米粒形成，與XRD分析結果一致。8.與Ost對照，Ost-S100-NP的體外釋藥具有顯著的pH依賴性。隨著pH值的升高，藥物釋放百分率逐漸增大，當pH≥6.0時，釋藥量均>80％。Ost-S

8、100-NP在pH6.8的磷酸鹽緩沖液中能夠完全釋放。9.相比溶液，Ost-S100-NP能明顯提高Ost的血藥濃度，延長達峰時間，降低藥物的血漿清除率，減緩藥物的消除，提高其生物利用度，相對生物利用度為168％。10.氟康唑合用甲氧基歐芹酚后能顯著提高系統(tǒng)性真菌感染小鼠的存活率，療效顯著增強，二者呈現(xiàn)明顯的協(xié)同作用。與Ost溶液相比，相同劑量的Ost-S100-NP合用氟康唑能更好的觀察到兩藥的協(xié)同作用，效果更為明顯。