TLX基因?qū)Υ笫笳嫫ざ嗄芨杉?xì)胞增殖和成神經(jīng)細(xì)胞分化及移植治療脊髓損傷的影響研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文TLX基因?qū)Υ笫笳嫫ざ嗄芨杉?xì)胞增殖和成神經(jīng)細(xì)胞分化及移植治療脊髓損傷的影響研究姓名：王濤申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：李露斯20080501第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文分化為神經(jīng)細(xì)胞，可能為SCI再生修復(fù)提供更合適的種子細(xì)胞。主要結(jié)果如下：1、利用設(shè)計合成的TLx簡并引物，以成年大鼠大腦組織總RNA為模板，進(jìn)行RTPCR，我們首次成功擴增出大鼠TLX全長編碼序列，序列在線BLAST發(fā)現(xiàn)，其與大鼠預(yù)測的TL

2、X序列99％相似，證實擴增和克隆成功，將大鼠TLX序列登陸GeneBank，獲得Geneaccessionnumber：EU316216。2、利用RT_PCR的產(chǎn)物，采用定向克隆的方法，先進(jìn)行T／A克隆，然后成功地將TLXcDNA全長序列亞克隆到pEGFPNl真核表達(dá)載體上。在此基礎(chǔ)上，將重組質(zhì)粒pEGFPNl一TLX轉(zhuǎn)染到DMSCs中，用熒光顯微鏡下觀察到熒光蛋白的表達(dá)和用ImPCR方法檢測到TLxmRNA的表達(dá)，說明TLx已成功轉(zhuǎn)染

3、DMSCs并能在DMSCs中表達(dá)。3、MTT法研究顯示TLX可以促進(jìn)DMSCs的增殖；DMSCs經(jīng)誘導(dǎo)后可分化成神經(jīng)細(xì)胞，分化出來的細(xì)胞中，星形膠質(zhì)細(xì)胞的比例較高，而神經(jīng)元比例較低。TLx可以促進(jìn)DMSCs向神經(jīng)元方向分化，TLX／DMSCs分化出來的細(xì)胞中，與未轉(zhuǎn)染TLx的DMSCs相比，神經(jīng)元的比例明顯增高，而星形膠質(zhì)細(xì)胞比例降低。4、將DMSCs和TLx基因修飾DMSCs移植入大鼠脊髓全橫斷處，結(jié)果顯示DMSCs和TLX基因修飾D

4、MSCs都能在宿主脊髓內(nèi)存活和整合，并使脊髓形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)達(dá)到部分恢復(fù)；行為學(xué)檢測檢測顯示大鼠脊髓運動功能得到部分恢復(fù)，其中移植TLX基因修飾DMScs使大鼠的功能恢復(fù)更好一些。綜上所述，我們首次成功的地擴增出大鼠TLx基因并構(gòu)建了含TLX基因全長編碼序列的真核表達(dá)載體。進(jìn)一步研究顯示TLX基因可以促進(jìn)DMSCs增殖和向神經(jīng)元方向分化，抑制DMSCs向星形膠質(zhì)細(xì)胞的分化；移植TLX基因修飾DMsCs可以促進(jìn)大鼠脊髓損傷后功能和形態(tài)的部分恢復(fù)