FBS和TLX影響視網(wǎng)膜干細(xì)胞增殖分化的基礎(chǔ)研究.pdf

1、目的：視網(wǎng)膜干細(xì)胞（RPC）是視網(wǎng)膜替代治療的良好資源。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究體外不同濃度血清（FBS）條件下，RPC的分化潛能以及TLX和微小RNA-9（miR-9）在控制RPC增殖分化方面的作用，以期為視網(wǎng)膜退行性疾病的干細(xì)胞療法提供新的思路。
　　方法：⒈體外培養(yǎng)小鼠RPC，按血清濃度將其分為四組（1％，5%，10%和20%）誘導(dǎo)分化。倒置顯微鏡下記錄細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)。定量聚合酶鏈反應(yīng)（qPCR）和免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)RPC分化相關(guān)的標(biāo)記物

2、表達(dá)。⒉轉(zhuǎn)染miR-9前體/抑制劑，或者針對(duì)TLX的小干擾RNA，48小時(shí)后收集細(xì)胞。通過(guò)qPCR、免疫細(xì)胞化學(xué)和蛋白質(zhì)免疫印跡分析視網(wǎng)膜發(fā)育相關(guān)的基因和蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:⒈1% FBS誘導(dǎo) RPC更多分成視紫紅質(zhì)（rhodopsin）和蛋白激酶C-α（PKC-α）陽(yáng)性的細(xì)胞。鈣結(jié)合蛋白（calbindin）和激活蛋白2α（AP2α）表達(dá)水平在5%FBS誘導(dǎo)條件下更高。Brn3a表達(dá)在20%FBS條件下減少。20% FBS誘導(dǎo)

3、產(chǎn)生更多膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）陽(yáng)性的細(xì)胞。⒉過(guò)表達(dá)miR-9，抑制TLX在RPC的表達(dá)水平，增加神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞的分化；而抑制miR-9的表達(dá)，TLX表達(dá)增加，并且促進(jìn)RPC增殖。小干擾RNA抑制TLX表達(dá)后，能減弱RPC增殖，促進(jìn)視網(wǎng)膜神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)分化。
　　結(jié)論:⒈低濃度血清有利于 RPC分化為視紫紅質(zhì)光感受器，有助于視功能的恢復(fù)。相反，高濃度的血清促進(jìn)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞分化。⒉ miR-9和TLX形成反饋調(diào)節(jié)控制RPC增