大鼠視網(wǎng)膜干細(xì)胞的培養(yǎng)及增殖和分化能力的研究.pdf

1、目前眼科醫(yī)生對(duì)一些直接損害視網(wǎng)膜細(xì)胞的疾病，如青光眼、視網(wǎng)膜變性疾病等仍無有效的治療辦法，而視網(wǎng)膜干細(xì)胞的研究為治療這些疾病帶來了希望。視網(wǎng)膜干細(xì)胞的體外培養(yǎng)、增殖和分化的研究已經(jīng)取得了一定的進(jìn)展，但也存在著培養(yǎng)體系不統(tǒng)一、增殖和分化機(jī)制不明確等問題。對(duì)視網(wǎng)膜干細(xì)胞的進(jìn)一步深入研究可以為將來的臨床應(yīng)用創(chuàng)造條件。
　　 [目的]探索應(yīng)用改良的方法培養(yǎng)大鼠視網(wǎng)膜干細(xì)胞，并比較不同年齡段大鼠視網(wǎng)膜干細(xì)胞增殖和分化能力的差異。
　

2、　 [方法]使用含血清培養(yǎng)基直接培養(yǎng)的方法對(duì)取材于15日齡胚鼠、出生24h內(nèi)大鼠和出生5d大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)層的視網(wǎng)膜混合細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)和傳代。使用免疫熒光染色和RT-PCR的方法研究視網(wǎng)膜干細(xì)胞的增殖和分化情況，并比較不同年齡段大鼠之間的差異。
　　 [結(jié)果]改良的培養(yǎng)方法成功地培養(yǎng)了大鼠視網(wǎng)膜干細(xì)胞并進(jìn)行了傳代。免疫熒光染色顯示隨著傳代的進(jìn)行，視網(wǎng)膜干細(xì)胞增殖并占據(jù)優(yōu)勢(shì)，同時(shí)逐漸向神經(jīng)節(jié)細(xì)胞方向分化。RT-PCR顯示隨著傳代的進(jìn)

3、行，15日齡胚鼠視網(wǎng)膜干細(xì)胞的Musashi和NestinmRNA表達(dá)水平基本不變，Thy-1mRNA表達(dá)水平逐漸上升；出生24h內(nèi)大鼠視網(wǎng)膜干細(xì)胞的MusashimRNA表達(dá)水平基本不變，NestinmRNA逐漸下降，Thy-1mRNA表達(dá)水平逐漸上升；出生5d大鼠視網(wǎng)膜干細(xì)胞的Musashi和NestinmRNA表達(dá)水平逐漸下降，Thy-1mRNA表達(dá)水平逐漸上升。
　　 [結(jié)論]改良的培養(yǎng)方法對(duì)于培養(yǎng)和傳代干細(xì)胞是穩(wěn)定而可