竹葉椒和簕欓的化學(xué)成分及竹葉椒鎮(zhèn)痛抗炎活性研究.pdf

1、花椒屬是蕓香科分布最廣的一屬，主要分布在亞洲、非洲、美洲、大洋洲的熱帶和亞熱帶地區(qū)。我國(guó)有39種，14個(gè)變種。在我國(guó)民間，竹葉椒(Zanthoxylumarmatum)被用于治療腹痛、牙痛等;簕欓(Z.avicenna)有活血止痛的功效。
　　疼痛是一種復(fù)雜的生理心理活動(dòng)，是臨床上最常見(jiàn)的癥狀之一。鎮(zhèn)痛藥物在人們的日常生活中使用的非常普遍。文獻(xiàn)研究顯示花椒屬植物中木脂素和生物堿類(lèi)化合物有抗炎、鎮(zhèn)痛方面的活性，因此從花椒屬植物中尋找

2、具有鎮(zhèn)痛活性的新化合物引起了研究者的廣泛關(guān)注。
　　第一部分、植物化學(xué)研究
　　用常規(guī)的柱層析(CC)、制備薄層層析(PTLC)、重結(jié)晶等手段對(duì)竹葉椒和簕欓的化學(xué)成分進(jìn)行了分離，并用UV、IR、MS、1H-NMR、13C-NMR、DEPT、2D-NMR、CD等光譜手段鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。
　　竹葉椒的根莖采集于廣西南寧，從其乙酸乙酯部位共分離得到了48個(gè)化合物，鑒定了其中的41個(gè)。包括20個(gè)雙四氫呋喃木脂素，4個(gè)三萜，2

3、個(gè)甾體，5個(gè)異喹啉類(lèi)和2個(gè)喹啉類(lèi)生物堿，4個(gè)苯的衍生物，2個(gè)香豆素，1個(gè)脂肪酸和1個(gè)烷烴。其中armatumin(Ⅰ-5)和armatunine(Ⅰ-39)為新化合物。去-N-甲基-白屈菜紅堿(Ⅰ-7)，isodecaline(Ⅰ-8)，羽扇豆醇(Ⅰ-13)，pinoresinol-di-3，3-dimethylally lether(Ⅰ-19),N-nomitidine(Ⅰ-20),methylxanthoxylol(Ⅰ-22),5'

4、-demethoxyepiexcelsin(Ⅰ-23)，對(duì)羥基苯甲酸(Ⅰ-24)， demethoxyaschantin(Ⅰ-25)，epiaschantin(Ⅰ-29),piperitol(Ⅰ-30), pinoresinol-3,3-dimethylallylether(Ⅰ-31),6-acetonyldihydrochelery-thrine(Ⅰ-41)，這13個(gè)化合物為首次分離，其中Ⅰ-23和Ⅰ-29為首次從蕓香科中分離得到。<

5、br>　　簕欓的根莖采集于廣西南寧，從其乙酸乙酯部位分離到16個(gè)化合物，鑒定了其中的9個(gè)，它們分別是香豆素(avicennin，Ⅱ-1;Luvangetin，Ⅱ-8;Xanthoxyletin，Ⅱ-9)、甾體(β-谷甾醇，Ⅱ-2)、三萜（α-香樹(shù)脂醇，Ⅱ-5;β-香樹(shù)脂醇，Ⅱ-6;羽扇豆醇，Ⅱ-7)、生物堿(去-N-甲基-白屈菜紅堿，Ⅱ-3)和苯的衍生物(鄰苯二甲酸二異丁酯，Ⅱ-4)。其中Ⅱ-2到Ⅱ-9，這8個(gè)化合物是首次從該植物中分離

6、得到。
　　第二部分、HPLC方法鑒定竹葉椒乙酸乙酯部位的主要成分
　　流動(dòng)相:乙腈-水。洗脫條件:0-20min，30％-50％乙腈;20-35min，50％乙腈;35-50min，50％-90％乙腈;50min-57min，90％乙腈。流速:1ml/min。檢測(cè)波長(zhǎng):233nm。乙酸乙酯部位主要的峰達(dá)到了基線分離，鑒定了其中8個(gè)主要色譜峰。它們分別是eudesmin，horsfieldin，(-)-fargesin，ko

7、busin，sesamin，L-asarinin，planispine A和pinoresinol-di-3,3-dimethylallyl。
　　第三部分、抗炎鎮(zhèn)痛藥理作用研究
　　第一節(jié)、體內(nèi)試驗(yàn)
　　藥理活性研究主要采用經(jīng)典的動(dòng)物行為學(xué)模型，包括醋酸扭體試驗(yàn)、福爾馬林試驗(yàn)、熱板法和二甲苯致炎法。選擇民間長(zhǎng)期使用、臨床療效確定的竹葉椒進(jìn)行研究。對(duì)中草藥竹葉椒進(jìn)行活性跟蹤，依次對(duì)其乙醇提取物，各個(gè)溶劑萃取部位，不同劑

8、量的乙酸乙酯部位及其四個(gè)流份，以及部分單體化合物的鎮(zhèn)痛和抗炎作用展開(kāi)研究，得到以下幾個(gè)主要的結(jié)果:
　　1)竹葉椒的乙醇粗提物在三種鎮(zhèn)痛模型上都表現(xiàn)出了鎮(zhèn)痛活性。尤其在醋酸扭體試驗(yàn)和福爾馬林試驗(yàn)的第二相，所有被選擇的劑量均表現(xiàn)出顯著性。
　　2)阿片受體拮抗劑納洛酮顯著的拮抗了竹葉椒粗提物對(duì)福爾馬林第一相的鎮(zhèn)痛作用，并對(duì)第二相也有一定的抑制性。
　　3)在竹葉椒各個(gè)溶劑萃取部位鎮(zhèn)痛活性篩選中，乙酸乙酯部位的鎮(zhèn)痛作用最強(qiáng)

9、(P＜0.001)，其它部位也表現(xiàn)出一定的鎮(zhèn)痛作用（P＜0.05）;
　　4)三種所選動(dòng)物模型中，不同劑量(800，400，200，100mg/kg)的乙酸乙酯部位，均有很好的抗炎和鎮(zhèn)痛活性。
　　5)對(duì)乙酸乙酯的幾個(gè)流份進(jìn)行鎮(zhèn)痛研究，隨著極性增大其鎮(zhèn)痛作用呈現(xiàn)逐漸減弱的趨勢(shì)。相同劑量下，乙酸乙酯各個(gè)流份對(duì)小鼠扭體次數(shù)的抑制率要弱于總乙酸乙酯部位。
　　6)在醋酸扭體動(dòng)物試驗(yàn)中，芝麻素在80 mg/kg，去-N-甲基-

10、白屈菜紅堿在20、40 mg/kg時(shí)表現(xiàn)出顯著的鎮(zhèn)痛效果。在小鼠耳腫脹試驗(yàn)中，(-)-fargesin在80mg/kg、(-)-yangambin在30mg/kg時(shí)表現(xiàn)出顯著的抗炎作用。
　　根據(jù)以上研究結(jié)果，得出如下結(jié)論:
　　1)竹葉椒鎮(zhèn)痛作用機(jī)制主要是抗炎鎮(zhèn)痛作用，阿片受體也有部分的參與。
　　2)竹葉椒的鎮(zhèn)痛作用可能是多種成分協(xié)同作用的結(jié)果。
　　3)結(jié)合已有的文獻(xiàn)，生物堿和木脂素類(lèi)化合物可能是竹葉椒鎮(zhèn)痛

11、作用的主要活性成分;木脂素類(lèi)化合物是其抗炎作用主要活性成分。
　　4)本研究得到了鎮(zhèn)痛活性成分芝麻素和去-N-甲基-白屈菜紅堿，以及抗炎活性成分(-)-fargesin和(-)-yangambin。
　　第二節(jié)、體外試驗(yàn)
　　在炎癥發(fā)生時(shí)，巨噬細(xì)胞通過(guò)釋放前炎性因子(TNF-α，IL-6)，以及炎癥介質(zhì)(NO，PGE2)而積極參與炎癥反應(yīng)過(guò)程。TNF-α和IL-6是炎癥中的關(guān)鍵因子，NO和PGE2的過(guò)度生成在炎性生理反

12、應(yīng)過(guò)程中也發(fā)揮著重要作用。本文中，采用脂多糖(LPS)誘導(dǎo)RAW264.7建立炎癥模型，來(lái)研究竹葉椒的抗炎機(jī)制。主要得到以下主要的結(jié)果:
　　1)芝麻素、L-細(xì)辛脂素、(-)-fargesin、pinoresinol-di-3，3-dimethylally lether、去-N-甲基-白屈菜紅堿、木蘭堿都對(duì)NO的生成在不同程度上有抑制作用。
　　2) L-細(xì)辛脂素和木蘭堿在100μM時(shí)對(duì)Raw64.7誘導(dǎo)的IL-6的產(chǎn)生有顯

13、著的抑制作用。
　　3)芝麻素對(duì)LPS誘導(dǎo)的TNF-α的生成有抑制作用。
　　4)芝麻素、L-細(xì)辛脂素、(-)-fargesin、pinoresinol-di-3,3-dimethylally lether、去-N-甲基-白屈菜紅堿、木蘭堿都在不同濃度上對(duì)PGE2的生成有顯著的抑制作用。
　　竹葉椒抗炎的機(jī)制涉及對(duì)前炎癥細(xì)胞因子(TNF-α、IL-6)、炎癥介質(zhì)(NO、PGE2)釋放的抑制。
　　今后我們將對(duì)分離