腎小管酸中毒患者血清抗腎小管抗體的檢測(cè).pdf

1、腎小管酸中毒(renal tubular acidosis,RTA)是由于近端及(或)遠(yuǎn)端腎小管功能障礙所致的代謝性酸中毒，而腎小球功能正?；驌p害輕微。本征主要特征有高氯性代謝性酸中毒、電解質(zhì)失衡，臨床上表現(xiàn)為煩渴、多飲、多尿、腎性佝僂病或骨軟化癥、腎鈣化癥等。目前大都將RTA分為4型：即Ⅰ型(遠(yuǎn)端腎小管酸中毒，distal renal tubular acidosis，dRTA)、Ⅱ型(近端腎小管性酸中毒，proximal renal

2、 tubular acidosis,pRTA)、Ⅲ型(混合型腎小管性酸中毒)、Ⅳ型(高血鉀型腎小管性酸中毒)。既往腎小管酸中毒曾被認(rèn)為是一種常染色體顯性或者隱性遺傳性疾病。但是近年來(lái)越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)腎小管酸中毒常伴發(fā)著某些自身免疫性疾病，提示RTA的發(fā)病可能與自身免疫因素有某些內(nèi)在聯(lián)系。其中以Ⅰ型RTA常見(jiàn)。 Ⅰ型RTA在成人往往表現(xiàn)為散在發(fā)病，在兒童多為家族發(fā)病。散在發(fā)病可以是原發(fā)的(幾乎都發(fā)生在女性)也可以是繼發(fā)性，如繼發(fā)

3、于自身免疫性疾病，尤其是干燥綜合征。干燥綜合征的腎損害較常見(jiàn)，不同的研究結(jié)果報(bào)告有所差異，但是多數(shù)認(rèn)為其發(fā)生率為40﹪-50﹪，而腎損害主要累及遠(yuǎn)端腎小管出現(xiàn)腎小管酸中毒。 免疫熒光技術(shù)(immunofluorescence assay,IFA)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)具有高度特異性，以異硫氰酸熒光素(FITC)、羅丹明(RB200)等熒光色素標(biāo)記物與已知的抗原或抗體結(jié)合，然后測(cè)定未知抗原或抗體的技術(shù)。熒光素與抗體的結(jié)合物稱為熒光抗體

4、，熒光抗體與相應(yīng)抗原的結(jié)合在熒光顯微鏡下顯示不同程度的熒光，由此可對(duì)抗原進(jìn)行定性、定量或定位的檢測(cè)。本實(shí)驗(yàn)即是采用間接免疫熒光技術(shù)，以FITC標(biāo)記的抗人IgG定性檢測(cè)腎小管酸中毒病人血清抗腎小管抗體的存在，從免疫學(xué)角度初步探討其發(fā)病的自身免疫性。 研究方法： 1．研究對(duì)象：確診為腎小管酸中毒患者血清11份，診斷依據(jù)為①臨床上有代謝性酸中毒，而尿PH值在6.0以上；②低血鈉、低血鉀及低鈣血癥，血氯明顯增高；③骨痛及骨軟化癥

5、。④輔助檢查發(fā)現(xiàn)骨質(zhì)疏松，病理性骨折或尿路結(jié)石等。健康對(duì)照者空腹血血清10份，采血前3月內(nèi)均無(wú)感冒、服藥史，性別、年齡與RTA患者匹配。干燥綜合癥患者血清10份，干燥綜合癥患者確診依據(jù)為①干燥性角膜炎；②口干燥癥：③血清中有下列一種抗體陽(yáng)性：抗SS-A抗體、抗SS-B抗體、抗核抗體(．ANA)>1：20、類風(fēng)濕因子(RF)>1：20，具備以上3條并除外其它結(jié)締組織病、結(jié)節(jié)病、移植物抗宿主病、淋巴瘤等疾病者可以確診?？瞻讓?duì)照使用PBS緩沖

6、液代替血清反應(yīng)。 2．研究方法：①抗腎小管基底膜抗體的檢測(cè)：采用歐蒙公司提供的猴腎間接免疫熒光法檢測(cè)試劑盒。第一次溫育時(shí)，已稀釋的血清與固定在載片反應(yīng)區(qū)中生物薄片上的猴腎冰凍切片反應(yīng)。如果標(biāo)本陽(yáng)性，特異性IgG、IgA、IgM抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合。在第二次溫育時(shí)，結(jié)合的抗體與熒光素標(biāo)記的抗人抗體反應(yīng)，然后在熒光顯微鏡下觀察特異的熒光模型。②抗腎小管細(xì)胞胞漿抗體的檢測(cè)：采用人體腎組織石臘切片，利用傳統(tǒng)的濕盒，使用10﹪山羊血清封閉非

7、特異性結(jié)合位點(diǎn)，起始采用血清原液。均使用共聚焦顯微鏡觀察并采集圖像。③腎小管酸中毒患者血清均測(cè)空腹血生化、血清蛋白電泳、血沉、ANA、ENA系列、尿常規(guī)、24小時(shí)尿蛋白定量。部分檢測(cè)甲狀腺功能，行腎臟B超、骨密度檢查。 3．統(tǒng)計(jì)分析：所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示。各組數(shù)據(jù)組間均數(shù)比較采用兩樣本t檢驗(yàn)或t’檢驗(yàn)(方差齊采用兩樣本t檢驗(yàn)，方差不齊采用t’檢驗(yàn))。檢驗(yàn)水平α=0.05。 結(jié)果： 腎小管酸中毒患

8、者血清抗腎小管抗體陽(yáng)性率為6/11，明顯高于干燥綜合癥患者組(1/10)和健康對(duì)照患者組。 結(jié)論： 腎小管酸中毒患者體內(nèi)存在抗腎小管抗體，主要為抗腎小管細(xì)胞胞漿抗體，提示腎小管酸中毒發(fā)病與自身免疫因素有關(guān)。 意義： 關(guān)于腎小管酸中毒免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制有不少的研究報(bào)道，但是尚無(wú)充分的實(shí)驗(yàn)室證據(jù)。該病在治療上也是一直沿用傳統(tǒng)的糾正酸中毒及電解質(zhì)紊亂、補(bǔ)鉀補(bǔ)鈣等對(duì)癥治療。本實(shí)驗(yàn)說(shuō)明腎小管酸中毒患者體內(nèi)存在自身抗體，