免疫組化聯(lián)合熒光原位雜交技術(shù)檢測多發(fā)性骨髓瘤分子細胞遺傳學異常及其臨床意義.pdf

1、目的:應(yīng)用免疫組織化學(Immunohistochemistry,IHC)聯(lián)合熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技術(shù)檢測多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)常見分子細胞遺傳學異常,并分析其臨床意義。
　　方法:對按照WHO診斷標準確診的20例初診MM患者,取骨髓組織石蠟包埋并切片,應(yīng)用IHC技術(shù)對骨髓石蠟切片進行CD138單克隆抗體標記,然后選取CD13

2、8+細胞豐富的骨髓石蠟切片,采用1q21/RB1、D13S319/p53、IGH三組序列特異性基因探針進行FISH檢測。同時以10例非惡性血液病患者骨髓組織切片為對照者建立各探針FISH檢測的正常閾值,檢測結(jié)果大于閾值為陽性,小于閾值為陰性。了解MM的分子細胞遺傳學異常的發(fā)生率并與臨床分型、分期和預(yù)后進行相關(guān)性分析,了解其臨床意義。
　　結(jié)果:
　　1.IHC聯(lián)合FISH技術(shù)檢測20例初診MM患者中16例檢出分子細胞遺傳學異

3、常(占80.0％),其中1q21擴增5例(占25.0%),RB1缺失6例(占30.0%),D13S319缺失9例(占45.0%),p53缺失3例(占15.0%),IGH基因重排10例(占50.0%)。檢出1種異常者5例(占25.0%),同時有2種異常者6例(占30.0%),3種異常者4例(20.0%),4種異常者1例(占5.0%)。
　　2.IHC聯(lián)合FISH技術(shù)與染色體G顯帶技術(shù)檢出率比較顯示:IHC聯(lián)合FISH技術(shù)檢出率80%

4、,而染色體G顯帶技術(shù)檢出率10.0%,兩組率的差異有顯著性(p<0.05)。提示IHC聯(lián)合FISH技術(shù)檢測MM分子細胞遺傳學異常明顯優(yōu)越于染色體G顯帶技術(shù)。
　　3.按年齡<50歲、50-60歲、>60歲分組,分子細胞遺傳學異常檢出分別為5例(83.3%)、6例(100%)、5例(62.5%)。應(yīng)用統(tǒng)計學分析,三組年齡段分子細胞遺傳學異常結(jié)果經(jīng)卡方檢驗?zāi)挲g>60歲與其他兩組比較差異有顯著性(P<0.05)。
　　4.MM患者

5、染色體與基因異常與其臨床分型、分期之間,P53基因與IgG型及Ⅲa期具有明顯相關(guān)性(P<0.05),染色體與基因異常以Ⅲ期和IgG型為主。
　　結(jié)論:
　　1.MM的分子細胞遺傳學改變多數(shù)為復雜核型,且多數(shù)存在數(shù)目與結(jié)構(gòu)異常。
　　2.對于MM患者來說,染色體G顯帶分析技術(shù)的分子細胞遺傳學異常檢出率低,應(yīng)用FISH技術(shù)可以提高MM患者的分子細胞遺傳學異常檢出率,同時還能夠發(fā)現(xiàn)常規(guī)細胞遺傳學技術(shù)不能檢出的有重要意義的基因

6、位點的微缺失或重排。但FISH在檢測MM遺傳學異常時常面臨骨髓稀釋、漿細胞數(shù)量過少等問題。IHC聯(lián)合FISH技術(shù)檢測MM分子細胞遺傳學異常,可以針對CD138+細胞的骨髓石蠟切片進行FISH檢測,有助于提高檢測效率。
　　3.IHC聯(lián)合FISH技術(shù)檢測MM分子細胞遺傳學異常,最常見的異常是IGH基因重排以及D13S319和 RB1缺失,其次是1q21擴增,P53缺失最少。
　　4.MM患者染色體與基因異常與其臨床分型、分期之