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文檔簡介
1、目的:
1.檢測L-選擇素、配體SLeX及配體合成酶FUT7在正常肝細胞株L-02及肝癌細胞株HepG2中的表達,分析表達變化與肝癌細胞轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。
2.探討低分子肝素對L-選擇素、SLeX、FUT7表達的影響及其對HepG2細胞株增殖、黏附和遷移的影響。
3.研究分別抑制L-選擇素與配體SLeX的表達后HepG2細胞遷移率及黏附率的變化。
方法:
1.RT-PCR、Western-b
2、lot、流式細胞技術(shù)和免疫細胞爬片化學(xué)染色方法分別檢測L-選擇素、SLeX、FUT7在L-02正常肝細胞株和HepG2肝癌細胞株中的表達。
2.FN蛋白黏附實驗、Transwell實驗觀察HepG2細胞株的異質(zhì)黏附性和遷移能力。
3.不同濃度低分子肝素作用于 HepG2細胞株,四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測其細胞生長抑制率,RT-PCR法、流式細胞技術(shù)分別檢測 L-選擇素、SLeX、FUT7表達量的變化。
3、4.分別用低分子肝素抑制L-選擇素,用抗SLeX抗體封閉HepG2細胞表面SLeX抗原后,接種于24孔Transwell小室檢測HepG2細胞遷移率的變化,F(xiàn)N蛋白粘附實驗觀察HepG2細胞株的異質(zhì)黏附性的變化。
結(jié)果:
1.從RNA水平,L-選擇素、SLeX、FUT7在正常肝細胞株L-02中均不表達,而在肝癌HepG2細胞株中都有表達;從蛋白水平,L-選擇素在HepG2細胞表達率為(10.09±0.5)%,West
4、ern-blot及免疫化學(xué)染色均顯示 SLeX在 HepG2細胞高表達而在L-02細胞則無表達。
2.低分子肝素對HepG2細胞株表達的L-選擇素及FUT7有抑制作用,而對SLeX的表達沒有影響,四甲基偶氮唑藍(MTT)法測低分子肝素對 HepG2細胞的生長有抑制作用。
3.分別減少L-選擇素及SLeX的表達量可以使HepG2細胞穿膜數(shù)減少(P<0.01);FN黏附細胞數(shù)減少(P<0.01)。
結(jié)論:
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