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文檔簡介
1、目的:以L02、HepG2、SGC7901、SW480四種細(xì)胞為研究對(duì)象,在基因和蛋白質(zhì)水平檢測(cè)干細(xì)胞因子(Stem Cell Factor,SCF)在四種細(xì)胞中是否表達(dá)及其表達(dá)水平。通過比較L02和HepG2中SCF表達(dá)水平,探討SCF與肝癌發(fā)生的關(guān)系;通過比較SGC7901、SW480、HepG2抑制組和非抑制組中SCF表達(dá)水平的差異,探討SCF與胃癌、結(jié)腸癌、肝癌的關(guān)系,闡明SCF在消化系統(tǒng)腫瘤發(fā)生中的作用。 方法:采用M
2、TT方法篩選藥物半數(shù)抑制濃度(IC50),以1/2IC50作為實(shí)驗(yàn)用藥物濃度。取對(duì)數(shù)生長期的L02、HepG2、SGC7901、SW480細(xì)胞,采用RT-PCR和Western blotting方法分別檢測(cè)四種細(xì)胞中SCFmRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)情況:分別取對(duì)數(shù)生長期的L02、HepG2、SGC7901、SW480細(xì)胞培養(yǎng)24h后隨機(jī)分為抑制組和非抑制組。抑制組在含1/21C50的CDDP培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)24h,非抑制組在不含CDDP的培養(yǎng)
3、液中繼續(xù)培養(yǎng)24h。采用RT-PCR方法檢測(cè)SCF的mRNA表達(dá)量,用Western Blotting方法檢測(cè)SCF蛋白質(zhì)表達(dá)水平,探討SCF與消化系統(tǒng)腫瘤發(fā)生的關(guān)系。 結(jié)果:CDDP對(duì)L02、HepG2、SGC7901、SW480四種細(xì)胞作用的IC50值分別為76.7±0.4μmol/L,40.6±0.6μmol/L,54.8±0.2μmol/L和66.9±0.2μmol/L。L02、HepG2、SGC7901和SW480細(xì)胞
4、均有SCF表達(dá),其mRNA表達(dá)量依次是0.767±0.012,0.617±0.038,0.589±0.087,0.546±0.077:蛋白質(zhì)表達(dá)量分別是0.905±0.005,0.713±0.060,0.353±0.055,0.606±0.165。CDDP抑制后四種細(xì)胞的SCF mRNA表達(dá)量依次是0.484±0.005,0.250±0.080,0.401±0.065,0.167±0.025;蛋白質(zhì)表達(dá)量分別是0.630±0.013,0
5、.440±0.115,0.293±0.072,0.317±0.046。L02和HepG2細(xì)胞抑制組的SCF mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)量均低于非抑制組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);HepG2細(xì)胞非抑制組SCF mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)量與L02非抑制組比較均減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在SGC7901、SW480和HepG2三種細(xì)胞抑制組中SCFmRNA表達(dá)量均較非抑制組減少,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。SGC7901細(xì)
6、胞抑制組SCF蛋白質(zhì)表達(dá)量與非抑制組比較雖顯示數(shù)量減少,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);SW480、HepG2細(xì)胞抑制組SCF蛋白質(zhì)表達(dá)量與非抑制組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論:SCF在L02、HepG2、SGC7901和SW480四種細(xì)胞中均有表達(dá)。在L02細(xì)胞中SCF mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)水平比HepG2高,說明胚胎時(shí)期肝細(xì)胞表達(dá)的SCF處于高水平;CDDP抑制L02、HepG2細(xì)胞增殖后,兩種細(xì)胞中SC
7、F mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)均下調(diào),提示肝組織癌變后SCF表達(dá)量可能下調(diào),SCF可能與肝癌發(fā)生有關(guān)。CDDP抑制SGC7901、SW480和HepG2細(xì)胞增殖后,SCF mRNA在三種細(xì)胞中表達(dá)量均下調(diào);SCF蛋白質(zhì)表達(dá)量也都下降,除SGC7901外,其他組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),表明SCF在促進(jìn)結(jié)腸癌、肝癌細(xì)胞增殖方面有一定作用,推測(cè)消化系統(tǒng)胃、結(jié)腸、肝組織發(fā)生癌變時(shí)SCF表達(dá)水平會(huì)升高,檢測(cè)細(xì)胞中SCF基因和蛋白質(zhì)表達(dá)量可以
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